目的 端粒酶是一种核糖核蛋白酶,能以自身的RNA为模板合成端粒DNA,从而维持端粒的长度,大多数肿瘤细胞表达端粒酶来维持端粒长度和阻止细胞衰老,从而获得永生化。人端粒酶含有445个核苷酸(hTR),模板区序列与人端粒DNA序列正好互补可作为逆转录合成端粒的模板。设计互补于hTR模板区的反义寡核苷酸封闭该模板区,就可抑制端粒酶合成端粒,从而使细胞退出增殖周期,达到治疗肿瘤的目的,因此端粒酶是肿瘤基因治疗的理想靶点。端粒酶在食管癌组织中高度表达,而且hTR的表达甚至早于端粒酶的激活。本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)作用于Eca-109食管癌细胞,观察其对食管癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对食管癌的治疗价值。 方法 将1-5μM的PS-ASODN与Eca-109细胞共同孵育,分别培养1d、3d、5d及7d后,采用MTT比色法测定PS-ASODN对Eca-109细胞的生长抑制率;采用倒置纤维镜观察5μM的PS-ASODN作用于Eca-109癌细胞72h后的细胞形态学改变;端粒酶活性检测采用半定量TRAP-银染法。 结果 1、1～5μM的PS-ASODN对Eca-109细胞的生长均有抑制作用,浓度≥2μM时,抑制率与对照组比较,有显著性差异,p<0.001。5μM的PS-ASODN作用5天,可使55.9%的细胞生长受到抑制。而N-ASODN对食管癌细胞的生长无抑制作用。提示PS-ASODN对Eca-109细胞的生长抑制作用具有剂量及时间依赖性和序列特异性。2、PS-ASODN作用后,Eca-109细胞的生长速度缓慢,细胞间连接疏松,细胞变圆漂起,并见细胞体积缩小,随作用时间延长,这种变化更明显。3、5μM的PS-ASODN作用24h后,端粒酶活性略有下降,相对端粒酶活性为94,3d端粒酶活性明显下降,相对端粒酶活性为62,与阳性对照组比较有显著性差异,p<0.05;而5d及7d时相对端粒酶活性分别为24及21。表明随作用时间延长,PS-ASODN对Eca-109细胞端粒酶活性的抑制作用逐渐增强,作用方式呈时间-依赖性。5μM浓度的N-ASODN在不同作用时间均未检测到端粒酶活性的下降。4、1～