肺炎链球菌35A NDP-D-mannitol合成途径中mnp1和mnp2的克隆与表达

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荚膜(capsule)为包裹在单个细菌细胞上,在细胞壁上有固定一层厚度不定的胶状物质。其主要成分为多糖,多肽或蛋白质,尤以多糖居多。荚膜多糖的表达是细菌在血液中的存活及其毒力大小的关键,同时它也是宿主抗体的目标以及制备有效抗原的基础。具有荚膜的细菌能表达许多不同的荚膜多糖,表现出抗原的高度变化性,肺炎链球菌的高度致病性是由于其荚膜多糖的多样性造成的。因此,研究荚膜多糖的合成机制,可以了解相关细菌的致病原因,为相关药物的制备提供依据,从而有效阻止细菌的感染。   在肺炎链球菌荚膜多糖中已发现的18种单糖及其衍生物中,mannitol-6-p是3种尚未确定合成途径的罕见单糖之一。明确其合成途径,不仅有助于我们了解荚膜多糖的形成机制,也为实现生物学方法体外合成该糖奠定基础。   根据已测得的Sp.35A荚膜多糖结构以及荚膜多糖基因簇序列,David M.Aanensen等人预测合成罕见单糖mannitol-6-p由mnp1和mnp2基因编码蛋白完成。我们利用生物信息学的手段进一步预测了mannitol合成的具体路线。   本文的工作是首先利用pET表达系统在E.coli BL21(DE3)中表达mnp1和mnp2基因编码的蛋白,并优化了最适的表达条件,同时对这两个蛋白进行了纯化。纯化后的蛋白可以进一步应用于酶促反应,从而对这些蛋白进行功能鉴定。
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