背景粘多糖病Ⅵ型（mucopolysaccharidosis type Ⅵ，MPS Ⅵ）又称Maroteaux-Lamy综合征（MIM#253200），由Maroteaux P和Lamy M于1963年首次报道。是一种罕见的溶酶体贮积病，呈常染色体隐性遗传。由于溶酶体内芳香基硫酸酯酶B（N-acetylgalactosamine-4-sulfatase，arylsulfatase B，ARSB）缺乏，导致硫酸皮肤素（dermatan sulfate，DS）和硫酸软骨素（chondroitin sulfate，CS）不能降解而蓄积在溶酶体内，从而引起细胞损害，并且过多的硫酸皮肤素和硫酸软骨素由尿中排出。粘多糖病Ⅵ型患病率在不同种族和地区间存在差异，约1/43261~1/1505160，中国台湾地区患病率为1/833000，中国大陆无流行病学统计数据。根据发病年龄及疾病的进展速度，临床上将粘多糖病Ⅵ型分为重型（婴儿型）、中间型（青少年型）和轻型（成人型）。重型粘多糖病Ⅵ型患者临床表现主要为3岁前发病，身材矮小、骨骼畸形、关节僵硬、肝脾肿大、角膜混浊等，但智力正常，多于20至30岁时死于心肺并发症。轻型患者起病晚、进展慢，存活时间较长。骨骼X线粘多糖病样改变、尿粘多糖（glycosaminoglycan，GAG）增多有助于诊断，且尿粘多糖水平与临床表型相关，当患者尿粘多糖与肌酐比值GAG/Cr大于200μg/mg时表现为重型，而当尿GAG/Cr小于100μg/mg时表现为轻型。确诊依赖外周血白细胞或培养的成纤维细胞ARSB酶活性测定。ARSB基因突变分析可以进一步从分子水平明确诊断。ARSB基因定位于染色体5q13-q14，包含8个外显子和7个内含子，转录一条2228bp的mRNA，编码一条含533个氨基酸残基的多肽。目前已报道的ARSB基因突变约150种，包括错义突变、无义突变、剪接突变、小片段缺失及插入、大片段缺失、indels突变，其中错义突变和无义突变最常见，约占73%。ARSB基因突变在不同种族及地区间存在差异，如在北美、南美、欧洲和澳大利亚这些国家的人群中，最为常见的突变为p.Y210C、p.S384N、c.1143-1G>C和c.1143-8T>G，突变率为10%以上；在巴西，最常见的突变为1533del123，突变率为23%。Wei-De Lin等报道的9例中国台湾地区粘多糖病Ⅵ型患儿中，p.F399L为最常见的突变，突变率为27.8%。目前尚不能完全明确基因型和表型的关系，突变p.L72R、p.Y255X等与重型相关，突变p.D83Y、p.R434I等与轻型相关，突变p.R102H、p.T442M等则与中间型相关。造血干细胞移植及重组人ARSB（如Naglazyme）酶替代治疗可显著改善粘多糖病Ⅵ型患者的预后，早期诊断，早期治疗可避免患者骨骼、心肺、眼等重要脏器的不可逆损伤。对于有先证者的高危家庭进行产前诊断，可预防疾病发生，减轻家庭及社会负担，改善人口素质。目的探讨粘多糖病Ⅵ型患儿的临床特征及ARSB基因突变特点，并进一步分析ARSB基因型与表型之间的关系。为今后进行粘多糖病Ⅵ型的遗传咨询和产前诊断建立基础。方法2009年1月至2013年12月广州市妇女儿童医疗中心内分泌代谢科对因“矮小、骨骼畸形”等就诊，疑似粘多糖病Ⅵ的患儿进行骨骼X线检查、尿粘多糖定量筛查，并经外周血白细胞ARSB酶活性测定确诊粘多糖病Ⅵ型患儿13例。回顾分析13例粘多糖病Ⅵ型患儿的临床特征，收集所有患儿及部分父母外周血标本，提取外周血基因组DNA，应用聚合酶链反应（PCR）及直接测序法，对患儿ARSB基因8个外显子及其两侧侧翼序列进行了突变分析，在检出患儿ARSB基因突变后，对有标本的患儿父母DNA进行相关序列检测，分析突变来源。对新突变位点，采用不同物种间氨基酸保守性分析、SIFT和PolyPhen-2软件等预测新错义突变致病性。结果13例粘多糖病Ⅵ型患儿,男6例,女7例,均于3岁前发病，发病年龄0.8~3岁，平均（1.5±0.8）岁，诊断年龄1.2~7.4岁，平均（3.9±2.2）岁。分别来自广东（9例）、江西（2例）、湖南（1例）及山东（1例）4省的不相关家庭；例11患儿父母为表兄妹，其他均否认近亲结婚史。13例粘多糖病Ⅵ型患儿临床分型均为重型，主要表现为面容粗陋、矮小、骨骼畸形、关节僵硬活动受限、角膜浑浊、听力下降、肝脾肿大、智力正常等。1例患儿曾因颈髓受压，出现行走不稳行颈椎脊髓减压术，术后行走不稳症状改善；1例患儿曾因腺样体肥大睡眠打鼾，严重影响睡眠行腺样体切除术，术后打鼾症状改善。X线骨片均符合粘多糖病样改变，如椎体前缘“鸟嘴样”改变、脊柱侧弯或后凸、肋骨呈飘带状改变等；1例MRI提示颈髓受压及放射冠、侧脑室和胼胝体多发囊性变。所有患儿尿GAG均增高，（307.10±112.14）mg/L（正常参考值<70mg/L），尿GAG/Cr（722.28±245.68）μg/mg；ARSB酶活性均降低，荧光法为2.70~24.90nmol/（mg·h），平均（13.29±6.22）nmol/（mg·h），[正常参考值范围（47~169）nmol/（mg·h）]；比色法为0~0.51U/g，平均（0.24±0.18）U/g[正常参考值范围（1.01~11.47）U/g]。对13例粘多糖病Ⅵ型患儿（26个等位基因）进行ARSB基因突变分析，共检出11种突变，检出率为76.9%（20/26）。11种突变中，错义突变6种（p.L72R、p.G167R、p.Y175D、p.G303E、p.F399L和p.T442M）；无义突变4种（p.Y255X、p.R327X、p.S403X和p.S464X）；大片段缺失1种（incl. ex.2、3）。其中已知致病突变7种，包括p.L72R、p.G167R、p.G303E、p.F399L、p.T442M、p.Y255X和p.R327X；新突变4种，包括p.Y175D、p.S403X、p.S464X及大片段缺失incl. ex.2、3。已知致病突变c.1197C>G（p.F399L）检出频率最高，为30.8%（8/26），其中1例为纯合突变（父母为近亲结婚）；另外已知致病突变p.R327X和新突变incl. ex.2、3分别见于2例纯合突变患儿（父母均非近亲结婚），其余突变仅见于个例患儿的其中一条等位基因。新错义突变p.Y175D突变位点氨基酸在不同物种（10个物种：人、黑猩猩、家牛、家猫、羚羊、鸡、甲鱼、蝙蝠、马、大鼠）间高度保守；且利用SIFT、PolyPhen-2软件对突变p.Y175D进行蛋白功能预测，评分SIFT为0.01，PolyPhen-2为1，均提示突变氨基酸影响蛋白结构及功能，考虑p.Y175D为致病性突变。新突变大片段缺失incl. ex.2、3导致翻译的蛋白缩短、结构改变而失去正常的催化功能，严重影响酶活性，猜测与重型相关。结论本研究通过回顾分析13例粘多糖病Ⅵ型患儿的临床特征，并进行ARSB基因突变分析，同时复习相关文献，可得到以下结论：1、重型粘多糖病Ⅵ型患儿起病早（<3岁），病情进展迅速，临床症状明显，主要表现为面容粗陋、身材矮小、骨骼畸形、关节僵硬活动受限、肝脾肿大、角膜浑浊、听力下降、智力正常等。2、粘多糖病Ⅵ型患者虽然智力正常，但头颅MRI可有异常的改变，如多发囊性变等；颈髓受压是本病常见的并发症，应提高警惕。3、尿粘多糖（GAG）水平与粘多糖病Ⅵ患者的临床表型相关，当患者尿GAG/Cr大于200μg/mg时表现为重型。4、通过ARSB基因突变分析，发现11种突变，其中新突变4种，包括p.Y175D、p.S403X、p.S464X及大片段缺失incl. ex.2、3。大片段缺失incl. ex.2、3可能与重型相关。5、突变c.1197C>G（p.F399L）是本实验ARSB基因的突变热点，且临床表型与重型相关。