慢性阻塞性肺疾病及糖尿病大鼠肺组织β2受体mRNA表达水平的研究

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目的为了观察慢性阻塞性肺疾病大鼠,糖尿病大鼠,慢性阻塞性肺疾病复合糖尿病大鼠肺组织β2肾上腺素能受体mRNA的表达及肺组织的病理改变,从而为该疾病的治疗提供新的思路。方法60只雄性5周龄(?)Vistar大鼠随机分为慢性阻塞性肺疾病组(COPD组,n=14)、糖尿病组(DM组,n=16)、慢性阻塞性肺疾病合并糖尿病组(COPD+DM组,n=18),正常对照组(CONTROL组,n=12)。采用实时荧光定量PCR的方法检测肺组织β2肾上腺素能受体mRNA的表达,并进行比较。每组大鼠从1开始标序,最后每组取前12号进行分析,如果试验中前12号大鼠有死亡,从13号开始依次递补。所有大鼠预饲养1周,COPD组造模采用脂多糖(LPS)气管滴入和烟熏的方法建模,DM组采用禁食12h后链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建模。COPD+DM组STZ法造DM模型成功后,与COPD组大鼠一起采用脂多糖气管滴入加烟熏法造模。CONTROL组处理:首先正常进食水及过夜禁食12h,腹腔0.1 mmol/L pH 4.2-4.5的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液,每只1ml。之后正常饲养,不做任何处理。期间注意观察动物外表及性情的改变,及时更换垫料保持卫生。40天后,空腹过夜,用10%水合氯醛3ml/Kg腹腔注射麻醉,开胸取左肺上叶置于10%甲醛中,固定48 h后,组织脱水,浸蜡,石蜡包埋切片,HE染色光镜下观察。取右肺中叶,放入液氮中保存,后用荧光实时定量PCR的方法检测各组大鼠肺组织β2肾上腺素能受体:mRNA的表达情况。结果1.肺组织学观察:正常对照组呼吸道及肺泡结构正常,支气管纤毛排列整齐,肺泡结构完整,无气肿及炎症。COPD组支气管黏膜纤毛上皮排列紊乱,部分脱落,肺间质及气道管壁炎性细胞浸润,管壁充血水肿,黏液分泌增加,有肺大疱形成。DM组支气管上皮纤毛有倒伏现象,部分脱落,基膜下有大量的炎性细胞浸润,COPD合并DM组部分支气管黏膜纤毛上皮完全脱落,肺间质,气管壁大量的炎性细胞浸润,部分肺泡壁破裂融合成肺大疱。2.PCR结果:4组大鼠肺组织β2-AR mRNA的△Ct值分别为:COPD组(7.56±0.54),DM组(7.63±0.60),COPD+DM组(9.19±0.89),CONTROL组(6.67±0.43),3个模型组与正常组比较β2-AR mRNA的表达明显下降,P<0.01, COPD与DM组无明显差别,P>0.05, COPD+DM组与COPD组、DM组相比β2-AR mRNA的表达明显下降,P<0.01结论1.不仅COPD组大鼠有肺部形态学的损害,DM组大鼠的肺组织也有明显的病理改变。2.慢性阻塞性肺疾病,糖尿病都可使肺组织的β2肾上腺素能受体mRNA的表达明显降低。但两者的下降程度无明显的区别,而慢性阻塞性肺疾病合并糖尿病使肺组织的β2肾上腺素能受体降低更加显著。
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