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1.研究目的: 本实验采用UAS-Gal4系统对果蝇基因dFoxO基因心脏特异性过表达并进行早期运动干预,研究dFoxO基因过表达联合早期持续3周、5周规律运动对中老龄果蝇心脏功能和睡眠的影响,探讨dFoxO的运动抗心脏衰老中的功能。 2.研究方法: W1118品系处女蝇、UAS-dFoxO品系处女蝇分别与Hand-Gal4品系雄蝇杂交,收集F1代Hand-Gal4>W1118(dFoxO基因正常表达果蝇),Hand-Gal4>UAS-dFoxO(dFoxO基因过表达果蝇)雌蝇各1600只。随机分为:Hand-Gal4>W1118-3WC,Hand-Gal4>W1118-3WE,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WC,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WE,Hand-Gal4>W1118-5WC,Hand-Gal4>W1118-5WE,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WC,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5 WE。每组各400只,每管20只,恒温(25±1℃),恒湿(50%-60%),12h昼夜循环条件下培养。 采用第3代果蝇运动装置,运动组果蝇均从2天龄开始训练,分别持续3周、5周运动,每次训练2h,运动训练时间为:9:00-11:00,每周休息2天,于运动后次日取材。 通过qRT-PCR测定果蝇羽化后第8天龄dFoxO基因正常表达对照组和过表达对照组果蝇mRNA表达量水平;应用M-mode心动图检测3周运动后(21天龄)和5周运动后(35天龄)的果蝇心脏功能;采用DAMS3系统监测果蝇3周运动后(21天龄)和5周运动后(35天龄)的昼夜活动节律;利用攀爬指数评定1周运动后次日到5周运动后次日果蝇运动能力。 3.研究结果: 3.1.果蝇心脏dFoxO基因mRNA表达检测结果 与Hand-Gal4>W1118组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO组表达升高,表达率达到156.7%。说明F1代果蝇dFoxO过表达品系构建成功。 3.2.果蝇心脏功能的M-mode心动图检测结果与Hand-Gal4>W1118-3WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3 WC组舒张直径减小(P<0.05),收缩直径无明显变化,缩短分数下降(P<0.05),且纤维性颤动显著下降(P<0.001)。与Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3 WE组舒张直径增加(P<0.01),收缩直径无明显变化,缩短分数显著升高(P<0.01)。与Hand-Gal4>W1118-3WE组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WE组纤维性颤动显著下降(P<0.001)。 与Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5 WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WE组舒张直径增加(P<0.01),收缩直径无明显变化,缩短分数升高(P<0.05)。与Hand-Gal4>W1118-5 WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WC组纤维性颤动有所下降(P<0.05),同周龄同基因运动组较安静组无明显变化。 3.3.果蝇睡眠昼夜活动节律的检测结果 与Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3 WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WE组总睡眠时间增加(P<0.01),总活动度减少(P<0.01),主要体现在日间睡眠时间提高(P<0.01),日间活动度降低(P<0.01),夜间睡眠时间提高(P<0.05),夜间活动度降低(P<0.01)。与Hand-Gal4>W1118-3 WE组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-3WE组总睡眠时间显著增加(P<0.01)。 与Hand-Gal4>W1118-5 WC组相比,Hand-Gal4>W1118-5 WE组总睡眠时间增加(P<0.05),总活动度减少(P<0.05),主要体现在夜间睡眠时间提高(P<0.01),夜间活动度降低(P<0.01).与Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WE组夜间睡眠延长(P<0.05),相应的夜间活动度减少(P<0.05)。与Hand-Gal4>W1118-5WC组相比Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WC组日间被打断次数和夜间被打断次数均减少(P<0.01),而运动组则无明显变化。 3.4.增龄果蝇攀爬指数检测结果 与Hand-Gal4>W1118-5WC组相比,Hand-Gal4>UAS-dFoxO-5WC组攀爬指数增加(P<0.05);与WC组相比,WE组攀爬指数降低(P<0.001)。 4.结论: 4.1.心肌组织dFoxO基因对于维持增龄果蝇心脏功能、睡眠、运动能力发挥重要作用,心肌组织dFoxO基因长期过表达可以改善因衰老所致的心脏功能、睡眠和运动能力的下降。 4.2.单纯dFoxO基因过表达可降低衰老所致的纤维性颤动的发生率,dFoxO基因过表达联合早期规律运动可显著延缓果蝇泵血能力的增龄下降,同时可以显著减少完整睡眠的缺失。