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松花粉,又名松花、松黄,始载于唐《新修本草》,其性味甘平无毒。松花粉是最早被人类食用的非蜂源纯净花粉,属于高效功能型食品,它集聚了大量的生命元素,饱含丰富的营养成分和活性物质,是天然微型营养库,堪称“花粉之王”,它可以全面调理人体各个系统,对人类健康大有裨益。目前已经证实多种中药多糖具有增强免疫的功效,但针对松花粉多糖的研究国内几乎没有报道,因此笔者所在课题组选择泰山松花粉多糖对畜禽的免疫增强作用为本研究的切入点。松花粉多糖是保持松花粉特效的营养成份之一,具有非常高的生物活性,松花粉破壁后多糖提取量显著提高。本课题组于春季采集泰山地区新鲜松花粉,过筛破壁后用水提醇沉法提取粗多糖,提取过程中用胃蛋白酶和Sevage试剂两种方法除蛋白,保证了粗多糖较高的纯度。1泰山松花粉多糖对小鼠免疫增强作用的影响目的是为了研究泰山松花粉多糖对健康小鼠免疫功能的增强作用以及对免疫抑制小鼠的免疫恢复作用。用改进的水提醇沉法提取泰山松花粉粗多糖。取清洁级昆明小鼠(雌性)160只,随机分为8组,3个多糖组(I,II,III),3个环磷酰胺(Cytoxan, CTX)-多糖组(IV,V,VI),另外2组为CTX对照组(VII)和正常对照组(VIII)。I、IV组多糖注射剂量为400 mg/kg,II、V组多糖注射剂量为200 mg/kg,III、VI组多糖注射剂量为100 mg/kg,从第1天连续皮下注射7天;IV、V、VI、VII组于第1天每只每次腹腔注射75 mg/kg CTX,隔1天注射一次,共计3次;VIII组皮下注射生理盐水。第8天,所有小鼠腹腔注射1头羽份的ND冻干苗,分别在免疫后3、10和15 d采取血液、脾脏和小肠,用β微量法检测血清抗体、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率、PI染色法检测脾淋巴细胞转化率,ELISA法检测小肠IgA含量。结果显示I、II、III组各指标均显著高于VIII组(P<0.05),其中I、II组与VIII组相比差异极显著(P<0.01)。IV、V组极显著高于VII组(P<0.01),VI组显著高于VII组(P<0.05),IV组结果与VIII组差异不显著。并且免疫后10 d的各组显著高于免疫后3 d的各对应组(P<0.05),与免疫后15 d的差异不显著。结果表明泰山松花粉多糖能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的抗体水平、血液淋巴细胞比率、脾脏淋巴细胞转化率以及小肠IgA含量,200 mg/kg剂量组多糖的效果即非常显著,400 mg/kg剂量组多糖能使CTX诱导的免疫抑制完全恢复到正常水平。2泰山松花粉多糖对兔出血症组织灭活疫苗免疫效果及兔生产性能的影响目的是为了研究泰山松花粉多糖免疫增强剂对兔出血症(rabbitvird hemorrhagic disease,RHD )组织灭活苗的免疫增强作用及对兔生产性能的影响。用兔出血症病料制备兔出血症组织灭活疫苗,然后加入不同剂量用水提醇沉法提取的泰山松花粉多糖(TPPPS)和黄芪多糖(APS)制备兔出血症多糖灭活苗。选取体重1kg左右的健康獭兔72只(兔出血症母源抗体效价为0),随机分为6组,3个松花粉多糖疫苗组(I,II, III),1个黄芪多糖疫苗对照组(IV),另外2组为无多糖疫苗对照组(V)和空白对照组(VI)。每只家兔注射疫苗液1ml,其中I、II、III组疫苗液中松花粉多糖含量分别为400 mg/ml、200 mg/ml、100 mg/ml,IV组疫苗液中黄芪多糖含量为400 mg/ml,V组疫苗液中不含多糖,VI组为注射等量生理盐水。分别在免疫后0、3、7、14、21、28、35、42 d采血,用β-微量法HA与HI检测血清抗体效价、全自动血细胞分析仪测定外周血淋巴细胞比率、PI染色法检测血液淋巴细胞增殖率;同时测量免疫兔每周的平均日采食量(ADI)和平均日增重(ADG)来评定松花粉多糖佐剂对其生产性能的影响。结果显示,I、II、III、IV组各指标均高于V组,其中I、II、IV组显著高于V组(P<0.05);I组极显著高于V组(P<0.01);I组显著高于II、III组(P<0.05),II组与III组总体差异不显著。IV组总体水平略低I组。多糖组各指标的峰值出现时间晚于无多糖组。结果表明不同剂量的泰山松花粉多糖免疫增强剂均能提高兔的免疫功能和生产性能,400 mg剂量的效果显著,并且能够延长兔出血症病毒组织灭活苗的免疫高峰期和兔的生长高峰期;松花粉多糖效果总体优于黄芪多糖。