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复方乌梅是由课题组通过体外抑菌、药效学和药动学试验相结合,筛选出的对鱼类细菌性疾病有良好防治效果的中药复方,其中的主要单味药是乌梅。研究表明复方乌梅中含有没食子酸、柠檬酸、苹果酸、黄芩苷和黄酮等成分,具有抑菌、抗病毒、抗氧化和收敛止血的作用。目前,免疫增强剂已广泛应用于鱼类病害防治,但关于中药复方添加免疫单体对鱼类免疫功能的影响尚未报道,因此,运用中药免疫增强剂或中药复方添加免疫单体探讨鱼类免疫功能的影响尤为重要。本研究以草鱼、湘云鲫为试验对象,研究了复方乌梅添加不同免疫单体对草鱼免疫功能的影响,测定了复方乌梅添加不同水平的甘草酸对湘云鲫免疫功能的影响,以及中药免疫增强剂“渔康”对草鱼免疫功能的影响,旨在探讨免疫增强剂对鱼类免疫功能的影响,为鱼类的病害防治和健康养殖寻找一条新途径,也为鱼类免疫学积累基础资料。1复方乌梅添加免疫单体对草鱼免疫功能影响的研究将壳聚糖、黄芪多糖、甘草酸以0.42%的添加量分别加入到含有1%复方乌梅的草鱼基础饲料中,在饲喂的第1、5、9、13、17、21 d分别取样,以草鱼的免疫器官肝脏指数、肾脏指数、脾脏指数,血清的碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,淋巴细胞吞噬活性以及NBT阳性细胞数量为依据,确定复方乌梅添加免疫单体对草鱼免疫功能的影响;用温和气单胞菌(Aeromonas sobria)对饲喂6 d后的草鱼进行细菌感染,记录死亡率,以确定复方乌梅添加免疫单体对草鱼死亡情况的影响。结果显示:攻毒后复方乌梅+壳聚糖组、复方乌梅+黄芪多糖组和复方乌梅+甘草酸组的死亡率分别为20.0%、25.0%、22.5%,比阴性对照组36.7%的死亡率分别降低了16.7%、11.7%、14.2%,差异显著(P＜0.05),其中复方乌梅+壳聚糖(Ⅴ)的草鱼死亡率显著低于复方乌梅试验组(Ⅳ)(P＜0.05)。复方乌梅+甘草酸试验组的肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数、碱性磷酸酶活性、血清总超氧化物歧化酶活性较其它各组显著升高(P＜0.05),复方乌梅+甘草酸试验组的NBT阳性细胞数量、淋巴细胞吞噬率(PP)和吞噬指数(PI)显著高于空白组、阴性对照组、阳性对照组(P＜0.05)。复方乌梅+壳聚糖和复方乌梅+黄芪多糖试验组的碱性磷酸酶、血清总超氧化物歧化酶活性较空白组和阴性对照组显著上升(P＜0.05),复方乌梅+壳聚糖和复方乌梅+黄芪多糖试验组的NBT阳性细胞数量较空白组、阴性对照组、阳性对照组显著上升(P＜0.05)。这些结果说明复方乌梅+甘草酸、复方乌梅+壳聚糖、复方乌梅+黄芪多糖均能明显增强草鱼的免疫功能和对温和气单胞菌的抗感染能力,而且复方乌梅+甘草酸的免疫效果优于复方乌梅+壳聚糖、复方乌梅+黄芪多糖。2复方乌梅添加不同水平的甘草酸对湘云鲫免疫功能影响的研究将甘草酸按一定比例的添加量分别加入到含有1%的复方乌梅的鲫鱼基础饲料中,在饲喂的第1、5、9、13、17、21 d分别取样。第10 d用温和气单胞菌(Aeromonas sobria)对湘云鲫进行攻毒试验,测定累积死亡率。结果显示:攻毒后,与阴性对照组41.7%)相比,仅添加1%甘草酸组(12.5%)的死亡率极显著地降低(P＜0.01),复方乌梅+0.25%甘草酸和复方乌梅+0.5%甘草酸试验组的死亡率分别为22.5%、17.5%,也显著地降低(P＜0.05)。复方乌梅+0.25%甘草酸试验组的NBT阳性细胞的数量较空白组、阴性对照组、阳性对照组极显著的上升(P＜0.01),而其肝脏指数、肾脏指数、脾脏指数、碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶活性、血清凝集抗体效价与阴性对照组相比均显著增加(P＜0.05)。复方乌梅+0.5%甘草酸试验组过氧化氢酶活性、NBT阳性细胞数量较空白组、阴性对照组、阳性对照组极显著地增强(P＜0.01),其碱性磷酸酶、凝集抗体效价显著地高于阴性对照组(P＜0.05)。1%甘草酸试验组的过氧化氢酶活性、NBT阳性细胞数量较空白组、阴性对照组、阳性对照组极显著的升高(P＜0.01),其肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数、碱性磷酸酶活性、凝集抗体效价与阴性对照组显著增加(P＜0.05)。本试验结果表明复方乌梅+0.25%甘草酸、复方乌梅+0.5%甘草酸和1%甘草酸均能有效的促进湘云鲫的免疫功能,并增强其对温和气单胞菌的抗感染能力,而且复方乌梅+0.25%甘草酸、1%甘草酸的免疫效果优于复方乌梅+0.5%甘草酸。从免疫水平和经济成本综合考虑,建议饲料中添加复方乌梅+0.25%甘草酸为宜。3中药免疫增强剂“渔康”对草鱼免疫功能影响的研究以29.63±3.29g的草鱼作为试验材料,将中药免疫增强剂“渔康”分别以0、62.5mg/kg、125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg的添加量加入到草鱼基础饲料中,在饲喂的第1、5、9、13、21、29、37 d检测草鱼的免疫器官指数、碱性磷酸酶活性、ANAE阳性率、血清抗菌活性以及凝集抗体效价等部分免疫指标。第7、19 d用温和气单胞菌(Aeromonas sobria)对草鱼进行细菌感染试验,测定累积死亡率。结果显示:两次攻毒后,250 mg/kg的药物添加量的累积死亡率较对照组显著地下降(P＜0.05),其它试验组的草鱼死亡率差异不显著(P＞0.05)。250 mg/kg试验组的特定生长率、饲料转化率及增重量较对照组均极显著增加(P＜0.01)。各试验组草鱼的血清凝集抗体效价均低于对照组,且差异极显著(P＜0.01)。250 mg/kg试验组的成活率、肝脏指数、头肾指数、碱性磷酸酶活性、淋巴细胞数量、血清抗菌活性较对照组显著地升高(P＜0.05)。62.5 mg/kg试验组草鱼的碱性磷酸酶活性均较对照组显著上升(p＜0.05),而其粒细胞数量却显著低于对照组(P＜0.05)。125mg/kg试验组草鱼的淋巴细胞数量与对照组相比显著地增加(P＜0.05),而其粒细胞、单核细胞数量显著低于对照组(P＜0.05)。250 mg/kg试验组草鱼的单核细胞数量显著低于对照组(P＜0.05)。500 mg/kg试验组草鱼的NBT阳性细胞数量与对照组相比显著降低(P＜0.05)。综上所述,整体上饲料中添加250 mg/kg“渔康”可以有效增强草鱼的生长性能、免疫功能以及其对温和气单胞菌的抗感染能力,而62.5 mg/kg、125/kg的药物添加量对草鱼的免疫功能有一定的增强作用,但其效果没有250 mg/kg的药物添加量明显。