【摘 要】
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作为危害水产养殖业的鱼类流行病,细菌性鱼病虽然随着致病因子的确定及其毒性研究的深入,以及免疫疫苗的成功研制,对水产养殖业造成的损害已有所降低.但是基因水平转移现象的
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作为危害水产养殖业的鱼类流行病,细菌性鱼病虽然随着致病因子的确定及其毒性研究的深入,以及免疫疫苗的成功研制,对水产养殖业造成的损害已有所降低.但是基因水平转移现象的发现,使得水产学者们意识到新型致病菌的产生将是养殖业的一大隐患.基于这种情况,该实验建立一套细菌致病因子的原位检测技术,为病原体致病基因在微生物群落中水平转移的可能及其出现频率的研究工作确立重要的研究手段.该实验以纯培养的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)为材料,以耐热的直接溶血素基因(Thermostable direct haemolysin,tdh)为检测对象,首先进行常规PCR的优化实验,获得扩增tdh基因的最优参数;以常规PCR扩增确认菌体中tdh基因的存在,并辅以传统的血平板进行溶血性实验以确证结果;然后对菌体进行固定、溶菌酶处理等前处理步骤,并利用最优参数对其进行原位扩增;产物上流式细胞仪检测并辅以荧光显微镜检测;最后在原位PCR-FC仪技术确立后,我们又对原位PCR的产物进行了原位DNA探针杂交,并再次联用FC仪,对含tdh基因的菌体再次检测,以进一步提升检测的可信度.
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