【摘 要】
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目的:过量以及长期的激素性股骨头坏死是临床医生面临的重大挑战,然而目前具体机制尚不清楚也尚未有良好的治疗缓解手段。线粒体的动力学平衡在疾病中扮演着重要的角色。我们推测,过量或持久的糖皮质激素的使用改变了骨髓内微环境,通过干扰SIRT3的功能,导致了线粒体动力学紊乱,诱发ROS生成增加,致使BMSC的增殖和分化异常,最终导致股骨头坏死的发生发展。丹酚酸B作为活性氧清除剂可以恢复因地塞米松诱导线粒体动
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目的:过量以及长期的激素性股骨头坏死是临床医生面临的重大挑战,然而目前具体机制尚不清楚也尚未有良好的治疗缓解手段。线粒体的动力学平衡在疾病中扮演着重要的角色。我们推测,过量或持久的糖皮质激素的使用改变了骨髓内微环境,通过干扰SIRT3的功能,导致了线粒体动力学紊乱,诱发ROS生成增加,致使BMSC的增殖和分化异常,最终导致股骨头坏死的发生发展。丹酚酸B作为活性氧清除剂可以恢复因地塞米松诱导线粒体动力学紊乱导致的BMSC增殖分化异常。方法:从人骨髓中提取间充质干细胞,首先使用流式细胞术进行干细胞表面标志物鉴定,其次检验其三系分化能力。使用CCK-8以及活死染色试剂盒检测不同时间点不同浓度地塞米松对细胞活性的影响以及丹酚酸B对细胞的影响。通过Annexin V–PI商业试剂盒,使用流式细胞术对凋亡进行检测。使用Westeron blot检测线粒体动力学相关指标,凋亡相关指标以及成骨相关指标以及使用透射电镜观察线粒体形貌。采用JC-1探针检测线粒体膜电位的变化。使用茜素红,碱性磷酸酶,油红O染色试剂盒进行成骨成脂的检测。采用DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平。结果:流式细胞数显示成功的提取了具有三系分化能力的骨髓间充质干细胞,细胞活性检测显示72h后,高浓度的地塞米松可以诱导干细胞凋亡。WB检测发现,高浓度的地塞米松促进细胞线粒体分裂增加。DCFH-DA检测显示细胞内ROS降低,成骨相关实验表明,高浓度的地塞米松抑制成骨,促进成脂。丹酚酸B处理后显著清除细胞内的ROS,促进成骨。结论:高浓度地塞米松通过促进线粒体动力学紊乱产生ROS从而抑制成骨,丹酚酸B通过清除细胞内ROS促进成骨。
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