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低白蛋白血症是严重腹腔感染患者常见并发症,血清白蛋白浓度与腹腔感染患者的预后和病情严重程度密切相关。血清白蛋白浓度与白蛋白的合成速率、分解速率、外源性丢失以及从血管内到血管外再分布有关,严重腹腔感染的低蛋白血症的形成机制仍然有很多争议。稳定同位素示踪技术测定体内蛋白质代谢是近20年逐渐发展的新技术,但是在国内,用稳定同位素示踪技术测定体内特定蛋白质合成率仍然没有展开研究。
目的:本研究尝试建立用稳定同位素2H5-苯丙氨酸测定肝脏白蛋白的合成率的方法,并研究严重腹腔感染时,腹腔开放疗法对家兔肝脏白蛋白合成率的影响。
方法:用三氯乙酸/乙醇提取血浆中的白蛋白,以Bradford法测定白蛋白浓度,行SDS-PAGE评估白蛋白纯度。用6M盐酸水解白蛋白,用PCX-SPE固相萃取血浆游离氨基酸及水解后的白蛋白水解液,分别用HFBA和MSTFA对苯丙氨酸进行衍生化,行GC-MS检测特征峰,建立标准曲线。建立新西兰兔蚓突结扎穿孔的严重腹腔感染模型。取30只新西兰兔,分为两组,(1)常规治疗组(n=15),动物于切除蚓突后常规关闭腹腔;(2)腹腔开放组(n=15),动物于切除蚓突后,予聚丙烯网片间断缝合腹壁肌层,行腹腔开放治疗;两组动物行蚓突结扎穿孔诱导腹腔感染20h后,切除蚓突。在首次手术术后24小时、72小时分别进行同位素输注实验测定肝脏白蛋白合成率,在时间点0,24,72取血标本测定血常规、肝功能、肾功能。
结果:
1.三氯乙酸/乙醇可以有效提取血浆白蛋白,可以保证白蛋白的纯度,和适当的蛋白质提取率(0.311±0.027);
2.MSTFA和HFBA都可以衍生化L-苯丙氨酸,但MSTFA比HFBA更经济,操作步骤少;
3.健康新西兰兔白蛋白FSR=16.93±1.01%,(n=4);
4.常规治疗组在24hr,72hr血浆白蛋白水平较术前下降幅度为7.25±1.35g/L,12.54±1.13g/L;腹腔开放组24hr,72hr血浆白蛋白水平较术前下降幅度为8.23±1.35g/L,12.53±1.10g/L;
5.对照组在24hr和72hr白蛋白FSR具有显著差异(分别为22.10±1.20 and20.15±1.20);治疗组在24hr和72hr白蛋白FSR差异不显著(分别为22.01±1.77 and21.78±1.31.775)。
结论:稳定同位素测定蛋白质合成率的相关技术可以应用于腹腔开放治疗严重腹腔感染的白蛋白合成率的评估。严重腹腔感染时,白蛋白合成率高于正常水平,但可能由于白蛋白分解速率更快,血清白蛋白浓度下降明显,提示代谢旺盛。运用腹腔开放疗法可以有效缓解由腹腔感染引起的腹腔高压,便于清除坏死组织,局部引流,并可以减缓白蛋白合成率下降的速度。