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目的建立体外BMSCs、NPCs非接触式共培养体系,探讨不同条件下NPCs诱导BMSCs向类髓核细胞分化的效果及影响因素。方法1.取新西兰大白兔4只,采用改良全骨髓细胞贴壁法获取BMSCs,进行BMSCs体外培养、纯化、扩增；2.通过细胞形态学观察、绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测,观察BMSCs的生物学性状并对其进行鉴定：3.取新西兰大白兔4只,采用改良酶联消化法获取NPCs,体外细胞培养技术对NPCs进行原代、传代培养；4.通过细胞形态学观察、绘制细胞生长曲线、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色、RT-PCR检测,观察NPCs的生物学性状并对其进行鉴定；5.取培养鉴定的BMSCs、NPCs,根据BMSCs与NPCs不同的细胞比例分为共培养组(2：1)、共培养组(1：1)、共培养组(1：2)、共培养组(1：4)、共培养(1：1)+TGF-β1组,以TGF-β1诱导组作为对照,建立BMSCs、NPCs非接触式共培养体系。各组培养15天后对经诱导的BMSCs进行实时荧光定量PCR检测,通过检测Aggrecan、 Collagen Ⅱ基因的相对表达量,从基因水平观察诱导效果,并对结果进行分析。结果 1.采用改良全骨髓细胞贴壁法能够获取BMSCs,经流式细胞仪检测纯度较高；2.采用改良酶联消化法能够获取NPCs,经基因水平、蛋白水平鉴定,均有Aggrecan、Collagen Ⅱ表达；3.不同条件下BMSCs、NPCs非接触式共培养体系和TGF-β1诱导体系均可诱导BMSCs向类髓核细胞分化,实时荧光定量PCR检测Aggrecan、Collagen Ⅱ基因表达阳性；4.不同细胞比例的共培养体系下,较高NPCs比例的共培养组与较低NPCs比例的共培养组相比,其诱导的类髓核细胞Aggrecan、Collagen Ⅱ基因表达量更高,组间差异有统计学意义；5.共培养条件下,经1：1细胞比例+10ng/ml TGF-β1诱导后类髓核细胞Aggrecan基因表达量较1：4比例共培养组的更高,差异有统计学意义。Collagen Ⅱ基因表达量与1：4比例共培养组接近,差异无统计学意义。6.体外TGF-β1诱导BMSCs向类髓核细胞分化后,类髓核细胞Aggreca、 Collagen Ⅱ基因表达量与细胞比例1：2共培养条件下诱导的类髓核细胞基因表达量相近,差异无统计学意义；结论体外TGF-β1共培养条件下NPCs均可诱导BMSCs向类髓核细胞分化,体系中BMSCs/NPCs的比例、TGF-β1含量对诱导效果均起重要作用。