目的探讨过表达的野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN)及其突变体G129E基因(仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失了脂质磷酸酶活性)对体外培养的活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)黏附与迁移的影响。方法利用293A细胞扩增实验所需的腺病毒(Ad-PTEN、Ad-G129E、AdGFP),并测定滴度;以腺病毒为载体将具有双重特异性磷酸酶活性的野生型PTEN基因及仅保留了蛋白磷酸酶活性的PTEN突变体G129E基因转染体外培养的活化大鼠HSC(HSC-T6株);采用Western blot检测HSC的PTEN蛋白表达;应用甲苯胺蓝染色法及MTT比色法测定HSC黏附能力;采用细胞划痕修复实验测定HSC的平面迁移能力;应用Transwell小室测定HSC的跨膜迁移能力。所有资料均应用Excel 2003建立数据库,采用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间比较采用LSD检验,P<0.05即认为有统计学意义。实验分组如下:①对照组(Control组):病毒转染时以DMEM基础培养基代替腺病毒;②空病毒组(Ad-GFP组):转染表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的载体空病毒;③PTEN重组腺病毒组(Ad-PTEN):转染携带野生型PTEN基因并表达GFP的重组腺病毒;④G129E重组腺病毒组(Ad-G129E组):转染携带G129E基因并表达GFP的重组腺病毒。结果1通过反复感染293A细胞的方法,获得实验所需腺病毒液Ad-GFP、AdPTEN及Ad-G129E,其滴度分别为:1.6×109pfu/m L、1.3×109pfu/m L、1.4×109pfu/m L。2 M.O.I.值100时,腺病毒感染HSC后48h,计数GFP荧光阳性表达细胞,测的Ad-GFP、Ad-PTEN及Ad-G129E各组腺病毒感染率均>80%。3腺病毒转染后48h,应用Western blot技术检测各组HSC的PTEN蛋白表达显示:Ad-PTEN组(1.08±0.07)、Ad-G129E组(0.97±0.04)明显高于Control组(0.56±0.05)及AdGFP(0.69±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);而Control组与Ad-GFP组及Ad-PTEN组与Ad-G129E组之间均无显著差异(P>0.05)。4甲苯胺蓝染色法测定HSC黏附力显示:在腺病毒感染HSC 48h,与Control组相比,Ad-GFP组细胞黏附抑制率(1.89±0.88)%,无显著差异(P>0.05);Ad-PTEN组细胞黏附抑制率(20.38±4.37)%及Ad-G129E组细胞黏附率(19.57±3.78)%显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);但Ad-PTEN组与Ad-G129E组之间细胞黏附率无显著差异(P>0.05)。5 MTT比色法检测HSC黏附力显示:与Control组相比,Ad-GFP组细胞黏附抑制率(6.17±4.98)%,无显著差异(P>0.05);Ad-PTEN组细胞黏附抑制率(38.13±6.93)%及Ad-G129E组细胞黏附率(35.83±4.24)%显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);但Ad-PTEN组与Ad-G129E组之间细胞黏附率无显著差异(P>0.05)。6细胞划痕修复实验结果显示:划痕后12h各组HSC均有迁移,但差异无统计学意义(P>0.05);划痕后24h HSC由两侧向中间迁移距离,Ad-PTEN组(332.35±6.23μm)、Ad-G129E组(336.77±5.25μm)明显低于Control组(391.34±10.41μm)及Ad-GFP组(392.66±10.41μm)(P<0.05),而Control组与Ad-GFP组及Ad-PTEN组与Ad-G129E组之间均无显著差异(P>0.05);划痕后48h HSC由两侧向中间迁移距离,与Control组(551.68±8.91μm)相比,Ad-PTEN组(468.74±19.29μm)及Ad-G129E组(462.48±13.47μm)明显减低(P<0.05),且较24小时降低更加明显,而Ad-GFP组(550.81±11.55μm)与Control组及Ad-PTEN组与Ad-G129E组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。7 Transwell小室细胞跨膜迁移实验结果显示:Ad-PTEN组跨膜细胞数(38.67±4.50)、Ad-G129E组跨膜细胞数(33.33±3.83)较Control组(67.67±6.28)及Ad-GFP组(64.67±5.53)显著减少(P<0.05),而Ad-PTEN组与Ad-G129E组及Control组与Ad-GFP组之间跨膜细胞数均无显著差异(P>0.05)。结论1野生型PTEN过表达可显著抑制活化HSC黏附、迁移。2 PTEN的突变体G129E对活化HSC黏附、迁移的抑制作用,与野生型PTEN相比无显著差异。3 PTEN基因通过其蛋白磷酸酶活性对活化HSC黏附、迁移发挥抑制作用。