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胰腺癌是目前恶性程度最高的消化道肿瘤之一,发病率及死亡率在全世界都呈现上升趋势,胰腺癌进展极快,并且起病隐匿,是目前预后最差的恶性肿瘤,由于胰腺癌的早期发现和早期干预非常困难,大多数胰腺癌患者发现时已发生转移,因此转移是胰腺癌治疗中的重大难题。然而胰腺癌转移是多因素参与的复杂过程,机制尚未明确,因此很有必要从分子水平明确发病机制,进一步寻找相应的干预途径和分子靶向治疗。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度在200~100 000 nt之间不编码蛋白的RNA分子,目前已知在多个层面调控基因表达,参与胚胎发育、细胞代谢、生长、分化等多种生理过程。近期研究发现,lncRNA在肿瘤细胞中常有异常的表达,其上调或下调可促进或者抑制肿瘤的发生和发展,作用类似于癌基因或是抑癌基因。PCGEM1是前列腺癌的特异性lncRNA,位于染色体2q32位点,在前列腺癌LNCaP细胞和小鼠成纤维NIH3T3细胞中高表达,能促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制肿瘤细胞的凋亡,可作为评价前列腺癌风险及其预后的可靠指标,是前列腺癌潜在的基因治疗靶点。研究目的:1、探讨PCGEM1在胰腺癌中的表达及在胰腺癌细胞生物学行为中的作用。2、探究潜在的分子机制,为临床针对胰腺癌的基因治疗提供理论依据。研究方法:1、荧光定量PCR检测人胰腺癌组织和癌旁组织及3种人胰腺癌细胞中PCGEM1的表达水平。2、上调或下调PCGEM1在人胰腺癌细胞中的表达后,检测PCGEM1对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响2.1分别在BxPC3和Pa Tu8988细胞中转染pCDH-PCGEM1及其空载质粒pCDH,在SW1990细胞中转染siRNA和其对照siRNA,并检测转染效率。2.2细胞克隆形成实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力。2.3 transwell迁移、侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力。3、上调或下调PCGEM1在胰腺癌细胞中的表达后,检测EMT相关蛋白及TGF-β/smad通路相关蛋白的变化。3.1 Western blot法及免疫荧光法检测EMT相关蛋白表达水平,荧光定量PCR检测MMP2、MMP9的mRNA表达水平。3.2 Western blot法检测TGF-β/smad通路相关蛋白的表达水平。研究结果:1、相对于癌旁组织,胰腺癌组织中PCGEM1表达水平较高。PCGEM1差异性表达于3种胰腺癌细胞中,其中SW1990表达水平相对较高,BxPC3和PaTu8988表达水平相对较低。2、过表达PCGEM1可促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。2.1成功在BxPC3和Pa Tu8988细胞中过表达PCGEM1,在SW1990细胞中降低PCGEM1的表达。2.2过表达PCGEM1后,细胞增殖能力增强,相反,降低PCGEM1表达,细胞增殖能力减弱。2.3胰腺癌细胞迁移和侵袭能力与PCGEM1表达水平呈正相关。3、PCGEM1通过TGF-β/smad通路促进EMT过程。3.1、Western blot法、荧光定量PCR示MMP2、MMP9的mRNA及蛋白在过表达PCGEM1后明显增加,反之减少。Western blot法和免疫荧光法结果显示过表达PCGEM1后α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ蛋白的表达量显著增加,而E-cadherin的表达量显著降低,而降低PCGEM1后相反。3.2、Western blot法结果表明过表达PCGEM1可以与smad2和smad3的磷酸化正相关,并增高了TGF-β和TGF-βreceptor的表达水平,并与smad4的表达呈负相关,而降低PCGEM1表达后结果相反。研究结论:1、PCGEM1相对高表达于胰腺癌组织中,并差异性表达于不同胰腺癌细胞系。2、PCGEM1促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。3、PCGEM1可通过调节TGF-β/smad通路促进胰腺癌细胞的EMT进程。