【摘 要】
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丝状病毒科的病毒可以引起人类以及其它灵长类动物严重出血热,尤其是埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）和马尔堡病毒（Marburg virus,MARV）。Lloviu病毒（Lloviu virus,LLOV）是在欧洲发现的一种新型蝙蝠源丝状病毒,是丝状病毒科Cuevavirus属的唯一成员。虽然目前没有LLOV病毒感染人类的报道,但它仍然是一种潜在的人类致病病原体。在已有的研究中,Vir
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丝状病毒科的病毒可以引起人类以及其它灵长类动物严重出血热,尤其是埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）和马尔堡病毒（Marburg virus,MARV）。Lloviu病毒（Lloviu virus,LLOV）是在欧洲发现的一种新型蝙蝠源丝状病毒,是丝状病毒科Cuevavirus属的唯一成员。虽然目前没有LLOV病毒感染人类的报道,但它仍然是一种潜在的人类致病病原体。在已有的研究中,Viral Protein 30（VP30）是丝状病毒科所特有的一种结构蛋白,与病毒核衣壳的主要组成成分-核蛋白（Nucleoprotein,NP）之间存在相互作用,这种相互作用可调节病毒RNA的合成。然而在LLOV中,其VP30与NP之间是否也存在类似的相互作用模式,目前并没有确凿的生物学实验证据。因此,本课题选取LLOV VP30C末端结构域（LLOV VP30 CTD）以及LLOV NP短肽为研究对象,开展针对LLOV VP30CTD蛋白及其与NP短肽相互作用的结构研究可以完善人们对于丝状病毒科VP30及NP-VP30相互作用关系的理解与认识,同时也可以为基于两者相互作用关系的抗丝状病毒药物研发奠定基础。本文主要的研究结果如下:（1）构建了LLOV VP30 CTD的表达载体,运用生物化学方法成功制备了纯度较高均一性较好的LLOV VP30 CTD蛋白,经过晶体初筛和优化得到LLOV VP30 CTD晶体,收集LLOV VP30 CTD晶体的X-衍射数据。（2）成功构建了LLOV NP短肽的表达载体,获得了纯度较高的LLOV NP短肽;通过GST-Pull Down实验证明LLOV NP短肽与VP30 CTD蛋白之间存在明显的相互作用。（3）构建了LLOV NP-VP30 CTD融合蛋白的表达载体,制备了高纯度的LLOV NP-VP30 CTD融合蛋白;经过晶体初筛和优化成功获得了高质量的NP-VP30 CTD晶体,收集了晶体的X-衍射数据,并解析出LLOV NP-VP30 CTD的三维空间结构。（4）LLOV NP-VP30 CTD的结构分析:在每个不对称单位中,两个VP30 CTD单体形成二聚体,其中一个VP30 CTD单体与NP短肽结合;另一个VP30 CTD单体不结合NP短肽。每个VP30单体都是由七个螺旋组成,其中,N端的六个α螺旋组成核心结构域,C端的第七个螺旋（H7）形成手臂结构域。疏水性分析发现,每个VP30 CTD主要存在三个保守的疏水性区域。通过对LLOV NP-VP30 CTD相邻不对称单位间的分析发现,一个不对称单位中未结合NP短肽的VP30 CTD的疏水性区域II与其相邻的不对称单位中结合NP短肽的VP30 CTD分子的螺旋3（H3）通过盐键相互作用,这使得该区域不再具备结合NP短肽的能力。此外,表面电势分析表明,二聚体分子交界面的一侧均为正电荷的聚集区。（5）LLOV NP-VP30 CTD的结构比较:将不对称单位中两分子的VP30 CTD单体进行了结构比较分析发现:它们的第4个螺旋（H4）在构象上存在明显的偏移,推测该偏移可以动态调节与NP短肽的结合。LLOV NP-VP30 CTD与同科其它病毒VP30 CTD的结构比较发现,该类蛋白在整体结构上十分相似。
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