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目的 探讨全反式维甲酸联合奥沙利铂对HCT116/L-OHP细胞耐药性的逆转作用及机制。方法 开始阶段利用HCT116结肠癌细胞实行小剂量奥沙利铂连续联合大剂量冲击的方法培养HCT116结肠癌耐奥沙利铂细胞（HCT116/L-OHP）;MTT法检测不同浓度下HCT116/L-OHP的OD值,根据OD值求IC50,进而求得HCT116/L-OHP细胞的耐药倍数;根据MTT法获得经过奥沙利铂联合不同浓度全反式维甲酸（ATRA）处理的HCT116/L-OHP细胞的IC50;采用荧光定量pcr法检测HCT116结肠癌细胞组、HCT116/L-OHP细胞组、处理组三组细胞LC-3、Beclin1、Bcl-2的基因表达量;蛋白质印迹法（Western Blot）检测HCT116结肠癌细胞组、HCT116/L-OHP细胞组、处理组三组细胞LC-3、Beclin1、Bax、P62、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 1本研究经过小剂量连续联合大剂量冲击的方法培养出结肠癌耐奥沙利铂细胞（HCT116/L-OHP）,采用MTT实验检测奥沙利铂对HCT116/L-OHP细胞活力的抑制作用及HCT116/L-OHP细胞的耐药稳定性,预实验结果显示L-OHP作用HCT116细胞的半数抑制浓度（IC50）值为6.3mg/L,HCT116/L-OHP细胞的IC50值为67.73mg/L,耐药倍数（resistance fold,RF）=10;发现不同浓度的奥沙利铂作用HCT116/L-OHP细胞培养后,细胞活力显著下降,表明奥沙利铂能够抑制HCT116/L-OHP细胞活力,且抑制作用呈剂量依赖性。2 MTT实验检测全反式维甲酸的最适浓度,培养24h后,细胞的存活率分别是:1 umol/L（0.901±0.026）、2 umol/L（0.741±0.029）、5 umol/L（0.505±0.037）、10 umol/L（0.295±0.019）、20 umol/L（0.096±.028）,根据奥沙利铂及全反式维甲酸对人结肠癌HCT-116细胞增殖活性的药物剂量依赖性实验结果,选取20mg/L奥沙利铂及5 umol/L全反式维甲酸作为后续实验药物剂量浓度。3由2-ΔΔCT分析法计算经对应处理24h后三组细胞内LC-3、Beclin1、P62 m RNA相对表达量,LC-3、Beclin1、P62 m RNA在HCT116细胞、HCT116/L-OHP细胞、经过全反式维甲酸作用后的耐药细胞三组中相对表达量分别为:LC-3（1.000±0.000、11.310±0.856、3.557±0.985*）、Beclin1（1.000±0.000、12.589±0.863、3.865±0.904*）、P62（1.000±0.000、0.308±0.068、0.972±0.057*）,提示全反式维甲酸与奥沙利铂联合用药时能逆转HCT116/L-OHP的耐药性,可能与下调耐药细胞中LC-3、Beclin1的mRNA的表达及上调P62mRNA的表达有关（P<0.05）。4 western blotting实验结果提示HCT116细胞、HCT116/L-OHP细胞、经过全反式维甲酸作用后的耐药细胞三组中LC-3、Beclin1、Bcl-2蛋白的表达量下调（P<0.05）,Bax、P62蛋白的表达量上调（P<0.05）。结论 1全反式维甲酸能够抑制HCT116/L-OHP细胞活力,且抑制作用呈剂量依赖性;2全反式维甲酸能够逆转HCT116/L-OHP细胞的耐药性,通过下调它的自噬性,诱导其凋亡;3综上可知:调控耐奥沙利铂的人类结肠癌HCT116/L-OHP细胞的自噬性,可作为增强癌细胞对化疗药敏感的新方法。图8幅;表4个;参163篇。