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目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染呈世界性流行,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌。研究发现,在急、慢性HBV感染过程中,都存在以促炎和抗炎细胞因子失衡为特征的炎症损伤过程。脂联素是近年发现的一类具有保护作用的脂肪细胞因子,其主要作用为调节能量代谢、提高胰岛素的敏感性、抗炎和抗肝纤维化作用。研究证实非酒精性脂肪性肝炎( Non-alcoholic Steatohepatitis,NASH)患者血清脂联素水平降低,并与肝脏炎症坏死、脂肪变和纤维化相关。但脂联素与慢性HBV感染的关系,及其对慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)预后、转归影响尚无确切报道。本研究通过检测各型慢性乙型肝炎患者血清脂联素水平,结合肝组织脂联素、脂联素受体2 mRNA和蛋白的表达,以探讨脂联素和脂联素受体2在各型慢性乙型肝炎发病过程中的变化特点及临床意义。方法:收集2009年01月-2010年12月我院门诊和住院CHB(中度)、乙型肝炎肝硬化(Liver Cirrhosis,LC)、慢性重型乙型肝炎(Chronic Severe Hepatitis B,CSHB)患者各20例。诊断均符合2005年中国《慢性乙型肝炎防治指南》和2006年中国《肝衰竭诊疗指南》标准。选择同时期本院正常健康体检者20名做为血清学健康对照。应用全自动化分析仪检测患者门诊首日或入院次日空腹血糖(Fasting Blood Glucose, FBG)、血清胆固醇(Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、白蛋白(Albumin)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、总胆红素(Total Bilirubin,TBiL)、凝血酶原活动度(Prothrombin Activity,PTA)水平;酶联免疫法检测HBV血清学标志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;定量PCR分析检测血清HBVDNA载量。检测抗-HAV、抗-HCV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其他嗜肝病毒及HIV感染。应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA)检测血清脂联素水平,严格按照说明书进行操作。HE染色观察肝组织普通病理变化,Masson三重染色观察肝组织纤维化程度。采用Power VisionTM二步法对肝组织进行脂联素和脂联素受体2免疫组织化学染色,棕黄色着色为阳性表达,用多功能病理图象分析仪测定脂联素和脂联素受体2表达面积百分比,每张片子取中央和四周五个区域,20倍物镜下计算平均面密度(阳性面积与统计场面积百分比)。逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测肝组织脂联素和脂联素受体2 mRNA的表达。应用SPSS17.0统计软件对实验数据进行分析。结果:1各组患者人口学与生化学指标的比较三组不同类型的慢性乙型肝炎患者在年龄、性别构成比、体重指数(Body Mass Index,BMI)、TC、TG均无统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比,CHB组、LC组和CSHB组患者血清ALT、TBiL渐次升高,白蛋白、PTA逐渐下降,尤其以CSHB组变化显著。2各组患者血清脂联素水平的变化CSHB组(0.821±0.149)和LC组(0.718±0.090)均较正常对照组(0.587±0.147)血清脂联素水平明显升高,F=13.296,P<0.05。CHB组(0.616±0.126)与正常对照组(0.587±0.147)比较差异无统计学意义(P>0.05)。3肝组织普通病理学的变化正常对照组HE染色显示:肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列,细胞形态正常,肝板结构完整。Masson染色:肝窦、中央静脉周围及汇管区未见纤维组织沉积;CHB患者HE染色显示:小叶内可见点灶状肝细胞变性、坏死,坏死灶及肝窦内以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,汇管区扩大,部分界板损伤。Masson染色可见:扩大汇管区内轻重不等的纤维组织沉积;LC患者HE染色突出表现为:肝板排列紊乱,假小叶形成。汇管区大小不一,可伴有程度不等的炎细胞浸润及界面炎。Masson染色显示:纤维间隔彼此交叉、连接,分割包绕正常肝细胞形成假小叶结构;CSHB患者HE染色表现为:肝细胞大块、亚大块状坏死,坏死区细胞结构脱失,伴大量炎性细胞浸润,部分坏死区可见残存和/或再生肝细胞岛,小胆管增生,可见胆栓。Masson染色显示:小叶结构紊乱不清,坏死区内纤维支架塌陷,周围组织可见大量胶原纤维增生。4肝组织脂联素和脂联素受体2 mRNA表达的变化与正常对照组(0.091±0.018)(0.075±0.016)相比,三组不同类型的慢性乙型肝炎患者脂联素和脂联素受体2 mRNA表达均明显升高,且以CHB0.123±0.019)(0.106±0.018)组、LC(0.196±0.017)(0.167±0.016)组、CSHB(0.245±0.028)(0.223±0.020)组顺序依次递增,各组间比较差异均有统计学意义。F值分别为45.675和63.386,P值均小于0.05。5肝组织脂联素和脂联素受体2蛋白表达部位与强弱的变化正常肝组织仅可见少量脂联素表达于肝细胞浆,随着CHB向LC、CSHB进展,脂联素表达逐渐增多。对比观察脂联素表达部位发现,CHB和LC组,脂联素主要表达在肝细胞胞浆。CSHB患者脂联素主要表达在肝窦间质细胞,在肝细胞少量表达。肝组织脂联素受体2表达量特点与脂联素变化一致,但表达部位均在肝细胞浆。对正常对照组(4.044±0.815)(2.804±0.622)、CHB组(5.545±0.613)(4.775±0.458)、LC组(6.553±0.614)(5.678±0.539)和CSHB组(8.482±0.772)(7.654±0.272)脂联素和脂联素受体2蛋白表达进行统计学检测,差异具有统计学意义。F值分别为45.675和63.386,P值均小于0.05。6相关性分析CHB组肝组织脂联素mRNA和蛋白水平与肝脏炎症评分正相关,相关系数为r =0.745、r =0.891,P值均小于0.05。CSHB组:肝组织脂联素mRNA和蛋白水平与ALT正相关,相关系数为r =0.702、r =0.583, P值均小于0.05。与白蛋白负相关,相关系数为,r = -0.683、r = -0.641,P值均小于0.05。CHB、LC和CSHB患者血清脂联素水平、肝组织脂联素mRNA和蛋白表达水平与血清HBVDNA水平均无相关,相关系数分别为r=-0.094、r=-0.131、r=-0.014、r=-0.254、r=-0.349、r=0.380、r=0.189、r=-0.302、r=-0.195,P值均大于0.05。结论:1血清脂联素水平在CHB组、LC组和CSHB组患者顺序依次升高,提示血清脂联素水平可以作为一个肝病严重程度的预测指标。2肝组织脂联素mRNA和蛋白水平与CHB患者肝脏炎症评分、LC患者肝脏纤维化评分和CSHB患者血清ALT水平均为正相关,与CSHB患者白蛋白负相关,提示脂联素在各型慢性乙型肝炎疾病进展过程中发挥重要作用。3脂联素在正常肝细胞胞浆少量表达;CHB和LC患者,脂联素主要表达肝细胞胞浆;CSHB患者,脂联素主要表达在肝窦间质细胞,肝细胞胞浆少量表达。4血清和肝组织脂联素与CHB、LC和CSHB患者血清HBV DNA水平无相关性,提示脂联素对HBV DNA的复制和清除无明显影响。