论文部分内容阅读
为揭示癌变机理,研究食管癌相关基因在食管癌发生发展中的作用,本文选取了在食管癌和正常组织明显差异表达的基因之一—EMP-1,从细胞和分子两个水平较全面系统地对其功能进行了研究。 我们首先构建了人EMP-1基因的真核表达载体,并转染人食管癌细胞系EC-9706,采用Western blot和RT-PCR技术从不同水平对转染后的EMP-1表达情况进行检测,绘制生长曲线,并通过流式细胞术检测细胞周期的变化。发现将EMP-1成功转入人食管癌细胞系EC-9706后,EMP-1基因表达量增高,细胞生长减慢,S期细胞减少,G1期细胞含量增多。 为得到EMP-1的诱导的基因表达谱,我们采用含有588个基因的微阵列尼龙膜,经过AtlasImage软件分析得到36个两倍以上差异表达的基因,其中包括29个上调基因,7个下调基因,即EMP-1的基因表达谱,选择4个基因用RT-PCR证实了微阵列结果的可靠性,经分析发现大部分基因属于细胞粘附分子和细胞外基质,说明EMP-1的功能和细胞的粘附及细胞间通讯有关。 为了解EMP-1的基因转录调控情况,我们采用了电泳迁移率变动分析技术对EMP-1基因的调控因子进行了分析,发现食管癌细胞核抽提物中C-MYC蛋白可以直接结合于EMP-1基因第一内含子的CACGTG序列上,说明EMP-1是C-MYC的靶基因之一,可接受C-MYC的调控。 综上所述,本研究发现EMP-1可影响食管癌细胞的生长周期,并引起与细胞粘附、通讯相关的基因表达谱的改变,而EMP-1基因又可作为原癌蛋白C-MYC的靶基因,参与食管肿瘤的形成和发展过程,是一个新的食管癌候选抑癌基因。