基于适配体的卡那霉素检测方法研究及应用

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卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素,是一种重要的抗感染药物,主要与革兰氏阴性菌作用,抗菌作用强而持久。当卡那霉素过度使用后,会造成其在动物源性食品中的残留,致使人体产生不同程度的损害。因此,必须建立快速、灵敏、高效的卡那霉素检测方法,进一步提高动物源性食品的安全性。本论文建立了基于核酸适配体的UV-vis光谱法和电化学法对卡那霉素进行定量分析,主要研究内容包括:在UV-vis光谱法中,通过利用巯基共价修饰的方式,将两段与卡那霉素适配体互补的单链DNA(ssDNA)分别修饰在金纳米颗粒(AuNPs)表面,得到两种功能化的AuNPs。加入卡那霉素适配体使之与功能化AuNPs表面的ssDNA配对结合,拉近AuNPs之间的空间距离,介导AuNPs聚集。与存在不同浓度的卡那霉素样品混合后,适配体与卡那霉素特异性结合使得聚集体解聚,表现为UV-vis光谱中AuNPs特征吸收峰的变化。利用527nm处吸光度的变化和卡那霉素浓度之间的关系实现对卡那霉素的检测。此法对卡那霉素的检测范围为1-500nmol·L-1,最低检测限为1nmol·L-1。在电化学法中,通过巯基共价结合方式将卡那霉素适配体修饰至金电极表面,卡那霉素适配体最佳修饰浓度为1μmol·L-1。然后将修饰好的电极浸泡在卡那霉素溶液中,卡那霉素与适配体最佳反应时间为30min。利用卡那霉素与其适配体特异性结合后的适配体构象变化引起电极表面电化学阻抗的变化,以[Fe(CN)3-6]-/4作为探针检测电化学信号,通过方波伏安法测得的电流变化来表征卡那霉素浓度。此法对卡那霉素的检测范围为0.2-2000nmol·L-1。分别用文中建立的两种方法和HPLC法检测不同浓度的卡那霉素比较验证其准确性,并以相同浓度的链霉素、庆大霉素、新霉素、四环素及超纯水代替卡那霉素进行实验验证其特异性,结果表明这两种方法均有较高的准确性和较强的特异性。利用上述两种方法对含有卡那霉素的牛奶样品进行检测。在UV-vis光谱法分析时对牛奶样品进行了预处理,预处理条件为:20%的三氯乙酸调节牛奶样品pH为4.6,45℃沉淀10min,10000r·min-1离心25min,然后用0.22μm的滤膜过滤。通过HPLC法对预处理的卡那霉素回收率进行评估,回收率达到94.43%。而在电化学分析时则将牛奶样品稀释5倍后直接进行测定。结果均表明所建立的两种方法能够实现对牛奶样品中卡那霉素残留的检测,证明其在实际样品检测中具有良好的应用。
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