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氰戊菊酯属于Ⅱ型拟除虫菊酯类农药，广泛用于农林害虫和家畜疾病传播媒介的防治。急性中毒主要表现为神经系统症状。然而，近年来有研究表明氰戊菊酯能干扰内分泌功能，认为是一种可疑的环境内分泌干扰物（EEDs），体外实验发现其有拟雌激素活性，流病资料也显示它有一定的生殖毒性，因此，从多角度探讨其生殖内分泌毒性机制有其现实意义。钙稳态是实现细胞生理功能和保持细胞结构完整的必要条件，细胞钙稳态失衡可影响Ca2+介导的一系列生化反应，如神经递质释放、激素分泌、卵子受精及DNA合成等。但迄今尚不了解Fen与生殖细胞钙稳态之间的关系。当细胞接受内源性或外源性信号传递，胞内游离Ca2+浓度或Ca2+的时空分布发生变化，即产生钙信号。在不同种类的细胞内，钙信使调节其下游特异靶分子，从而介导细胞分裂、胞间通讯、激素分泌等各自不同的生理、生化反应。有关实验表明，钙信号参与促性腺激素刺激下的卵巢颗粒细胞类固醇合成。因南京医科大学硕士学位论文此，本研究首先探讨了氰戊菊醋对卵巢细胞、乡尸巢组织钙稳态的影响，接着研究了氰戊菊醋对卵巢颗粒细胞类固醇合成的影响，试图探讨钙信号通路在氰戊菊醋影响血清类固醇激素水平中的作用。 第一部分氛戊菊醋对卵粱钙稳态的影响目的从整体和细胞两个水平观察氰戊菊醋对卵巢钙稳态的影响。方法1.体内实验:雌性SD大鼠染毒30天，作为动物模型，分 一个对照组，三个染毒组（1 .91，9.55，31 .80m叭g），灌胃给药。 （l）原子吸收法测定大鼠血清钙离子水平。 （2）定磷比色法测定卵巢组织ca2+一ATP酶、磷酸化酶a（P一a） 的活性。 （3）酶免法（EIA）测定各动情周期卵巢钙调素（C aM）含量的 变化。 （4）电镜观察卵巢细胞超微结构。 2.体外实验:采用原代培养的人卵巢颗粒黄体细胞（hGLCS） 作为细胞模型。 （l）激光共聚焦显微镜（L SCM）观察氰戊菊醋瞬间染毒对 hGLCS钙稳态的影响。 （2）免疫荧光法测定氰戊菊醋对hGLCs内caM总含量的影 响。 （s）流式细胞术测定氰戊菊醋对hGLCs内CaM相对活性的 影响。南京医科大学硕士学位论文结果（l）在体内实验中，染毒大鼠血清钙离子浓度上升。与对照组（22 1 .5士1 7.3似g/ml）相比，3 1 .somg/kg组血清钙离子浓度明显升高（253.0士39.7 09/ml），差异具有显著性（p<0.05）。染毒大鼠eaZ气灯P酶活性总体趋势下降（对照组103.9士10.57omol磷.9.蛋即，.h一’，1.glmg/kg组80.6士5.11协mol磷.9.蛋白一’.h一’）;磷酸化酶a活性增高，均高于对照组，差异均有显著性（P<0.05）。卵巢CaM含量升高，在动情期存在显著性差异（对照组357士232 ng/ml，1 .glmg/kg组905士308ng/ml，3 1 .somg/kg组1 106士367 ng/ml）。卵巢黄体细胞超微结构发生病理变化。 （z）在体外实验中，氰戊菊醋浓度为20.0 0 mol几、2.0 0 mol/L时，可见hGLcS胞内游离ca2+浓度（[C aZ下）缓慢上升，外钙内流为胞内钙升高的主要来源。氰戊菊醋染毒24h，免疫荧光法测得hGLcS内CaM总含量显著升高，其相对活性也呈现上升趋势。结论氰戊菊醋对卵巢组织、卵巢颗粒细胞钙稳态存在一定影响。 第二部分氛戊菊醋对卵粱类固醇合成的影响目的观察氰戊菊醋对卵巢类固醇合成的影响。方法雌性SD大鼠染毒30天，作为动物模型。阴道涂片法确定大鼠动情周期，染毒结束，放免法测定血清雌二醇（EZ）、孕酮（P4）含量。采用原代培养的人颗粒黄体细胞（h GLCs）作为细胞模型。氰戊菊醋染毒24h，测定FSH刺激的卵巢颗粒细胞EZ，P;及cAMP的生成量。结果体内实验中，大鼠血清E:水平有升高趋势。P4水平降低，南京医科大学硕士学位论文l.glmg/kg组（1.05士o.36ng/ml）与对照组（2.22士l.78ng/ml）相比，差异有显著性（P<0.05）。体外实验中，氰戊菊醋抑制FSH刺激的hGLCs EZ及P4合成。细胞cAMP含量也显著下降。在钙通道阻滞剂维拉帕米和caM抑制剂三氟拉漆（T FP）存在的情况下，氰戊菊醋促进FsH刺激的P;合成。结论氰戊菊醋干扰卵巢细胞类固醇合成，钙信号通路可能为其影响机制之一。