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[目 的]研究异氟醚预处理通过抑制Kupffer细胞的焦亡非经典途径对肝脏缺血再灌注损伤产生的保护作用。[方 法]体内实验:建立HIRI小鼠模型。取30只健康C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)、异氟醚组(iso组)和肝脏缺血再灌注损伤组(HIRI组),每组10只。其中iso组小鼠经1.4%异氟醚吸入30分钟后间隔30分钟进行肝脏缺血再灌注手术。用组织HE染色切片观察、病理评分法和检测血清ALT/AST法检测异氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。用ELISA法检测血清细胞焦亡相关炎症因子IL-1 β和IL-18的水平,评价异氟醚预处理对细胞焦亡的抑制作用。用Western Blot法检测肝脏组织中细胞焦亡非经典途径相关因子caspase-11的蛋白表达,评价异氟醚预处理对细胞焦亡非经典途径的抑制作用。用双标免疫荧光法标记肝组织中的Kupffer细胞检测caspase-11在Kupffer细胞中的表达情况,评价异氟醚预处理对Kupffer细胞的焦亡非经典途径的抑制作用。体外实验:取30只健康健康C57BL/6小鼠提取肝脏中的Kupffer细胞,将细胞分为对照组(control组)、乳化异氟醚组(emiso组)和内毒素组(LPS组),control组细胞于培养基中进行常规培养,emiso组细胞培养基中加入0.28mmol/L乳化异氟醚培养30分钟后加入1ug/ml LPS,LPS组细胞培养基中加入1ug/ml LPS,3组细胞培养24小时。用ELISA法检测细胞培养上清中IL-1 β和IL-18的水平。用Western Blot和免疫荧光法检测Kupffer细胞中caspase-11的蛋白表达情况。RT-PCR用于从mRNA水平检测各组Kupffer细胞中caspase-11的表达情况,验证异氟醚预处理对Kupffer细胞的焦亡非经典途径的抑制作用。[结 果]体内实验中,HE染色切片的Suzuki’s评分结果显示HIRI组分数较sham组显著增高(P=0.001),而iso组的分数较HIRI组显著降低(P=0.033);血清ALT/AST检测结果显示HIRI组血清水平较sham组显著增高(ALT:P<0.001;AST:P<0.001),而iso组的血清水平较HIRI组显著降低(ALT:P<0.001;AST:P=0.002);ELISA结果提示血清中IL-1β与IL-18在HIRI组中表达明显高于 sham 组(IL-1β:P<0.001;IL-18:P=0.005),iso 组中 IL-1β 与 IL-18 均明显低于 HIRI 组(IL-1β:P=0.006;IL-18:P=0.039);Western Blot 提示HIRI组小鼠肝脏组织中caspase-11表达显著高于sham组(P<0.001),而iso组小鼠肝脏组织中的caspase-11表达较HIRI组明显降低(P<0.001)。免疫荧光的结果显示HIRI组小鼠的caspase-11在被标记的Kupffer细胞中的表达明显高于sham组(P<0.001),而iso组则较HIRI组有所降低(P<0.001)。体外实验中,ELISA结果显示Kupffer细胞培养上清中LPS组中IL-1 β与IL-18显著高于 control 组(IL-1β:P<0.001;IL-18:P<0.001),而 emiso 组中 IL-1β 与 IL-18 较 LPS 组明显降低(IL-1β:P<0.001;IL-18:P<0.001)。Western Blot和免疫荧光的结果均显示LPS组Kupffer细胞的caspase-11表达显著高于control组(P<0.001)),emiso组Kupffer细胞的caspase-11表达较LPS组明显降低(P<0.001))。RT-PCR 结果显示相较 control 组,LPS 组 Kupffer 细胞的 caspase-11 mRNA 水平明显升高(P<0.001)),而emiso 组的 caspase-11 mRNA 水平较 LPS组明显降低(P<0.001))。[结 论]异氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,而这种作用与肝脏固有巨噬细胞——Kupffer细胞的焦亡非经典途径的抑制相关。