EGFR基因位于第7号染色体的p1 1.2,编码横跨细胞膜表面的糖蛋白受体。EGFR为酪氨酸激酶受体,是蛋白激酶家族重要一员。EGFR与其配体结合成二聚体,随后酪氨酸自身磷酸化启动下游各通路,从而调节细胞的增殖,分化,凋亡等。在多种癌症中EGFR信号通路的改变导致了癌细胞更难以被清除。大量文献报道EGFR蛋白的高表达与多种肿瘤的分期和预后相关。近年来表观遗传学的调控机制已经成为研究的热点,表观遗传学信息是指基因的DNA序列未发生变化而表型发生了改变,并且这种改变在发育和细胞增殖过程中能稳定遗传。DNA甲基化是表观遗传学调控机制之一。本研究旨在研究非小细胞肺癌中EGFR表达与临床各指标间的联系,并探讨EGFR启动子甲基化调控的改变与EGFR表达间的相关性。[目的]1.应用免疫印迹法检测肺癌组织和正常组织样本中EGFR蛋白表达,并研究样本中EGFR表达水平与组织分类,临床分期,样本病理等临床资料的相关性。2.应用甲基化特异性PCR检测肺癌组织和正常组织样本中EGFR基因启动子区CpG岛甲基化情况,并研究样品中EGFR启动子甲基化水平与EGFR的表达差异间的相关性。[方法]1.收集2015年12月至2016年5月间云南省肿瘤医院收治的手术切除的50例非小细胞肺癌患者的癌组织与正常组织样本。入选标准为:①手术切除标本经病理诊断为非小细胞肺癌②术前未经过任何抗肿瘤治疗③肿瘤经手术切除,切缘为阴性。④年龄≥30岁,≤75岁。2.将病人标本收回后,用液氮冰冻后至-80℃冰箱中保存。组织研磨后用试剂盒提取DNA,用Ripa提取蛋白,并测定其吸光度和浓度。提取后放回-80℃冰箱中保存待后续处理。3.BCA测定蛋白浓度,并使用Western-blot测定EGFR的蛋白表达。4.提取的DNA进行急速重亚硫酸盐处理,并用甲基化引物进行扩增,运用琼脂糖凝胶电泳,观测其表达差异。5.Western-blot 结果采用图像分析处理软件(ImageJ,National Institutes of Health)进行半定量分析。6.应用SPSS20.0软件包的分析和统计,各组间实验数据进行正态分布,方差齐性检验,非正态分布数据之间的差异用卡方(chi-square test)和秩和(Wilcoxon signed ranks test)检验法,应用非线性相关分析进行相关性分析。[结果]1.在非小细胞肺癌中癌和正常组织中EGFR的表达有统计学差异(p=0.009),EGFR在癌中高表达。2.EGFR的表达与淋巴结转移有统计学意义(p=0.008) , EGFR表达越高,淋巴结转移的可能性增加,两者呈正相关。3.EGFR的表达与EGFR启动子区甲基化具有统计学意义(p=0.025),甲基化程度降低时EGFR的表达上调,两者呈负相关。[结论]1.EGFR在肺癌组织中相对高表达,且EGFR在肺癌的癌组织中相对表达与淋巴结转移相关,说明EGFR的表达可能成为临床上判断疾病进展的指标和治疗的靶点。2.EGFR的表达与甲基化的改变具有相关性,肺癌的癌组织中EGFR启动子相对低甲基化时EGFR表达有增高趋势,EGFR启动子相对高甲基化时EGFR表达有降低趋势,所以EGFR的表达可能与启动子甲基化状态相关,为以EGFR为靶点的肿瘤靶向治疗提供了新的思路。