玫瑰孢链霉菌产达托霉素发酵工艺研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zylalazy
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本论文采用单因素法、正交试验法以及响应面法对达托霉素发酵条件及发酵培养基进行了优化,同时考察了补加葡萄糖以及氨基酸对达托霉素发酵的影响,结果如下:建立了测定发酵液中达托霉素含量的反相HPLC方法,色谱分析条件为:Hypersil ODS2(4.6mm×250mm,5μm);流动相为含0.1%三氟乙酸的乙腈/含0.1%三氟乙酸的超纯水(45/55,V/V);流速为1.0ml/min;进样量为20μl;检测波长为220nm。以玫瑰孢链霉菌H11为达托霉素生产菌,通过摇瓶单因素试验法对达托霉素发酵条件进行了优化,确定了最佳发酵条件为:接种龄42h,接种量2%,装液量25ml,温度28℃,初始pH7.5。通过正交试验法优化了达托霉素发酵培养基,在此优化的培养基及条件下,达托霉素的产量提高了107.99%。利用PB设计、最陡爬坡实验、CCD实验相结合的统计学方法对影响达托霉素发酵的培养基组分及主要外在条件进行了进一步的优化和评价,确定了达托霉素摇瓶最佳发酵条件,达托霉素产量的预测值为184.67mg/L。发酵验证试验测得达托霉素的产量为191.99mg/L,与优化前相比达托霉素产量提高了2.25倍,表明此方法对于优化达托霉素发酵条件是一种可行、有效的方法。在摇瓶及2.5L发酵罐中研究了补加葡萄糖对达托霉素发酵的影响。摇瓶发酵结果表明:初始葡萄糖为40g/L时最佳;在对数生长期后期补加20g/L的葡萄糖,达托霉素产量提高了39.77%;在对数生长期和稳定期分4次共补加20g/L的葡萄糖,达托霉素产量提高了62.06%。2.5L发酵罐补料分批发酵结果表明,从发酵12h开始共流加30g/L葡萄糖,不仅有效地延长了抗生素的合成期,而且提高了菌体合成抗生素的能力,最终使达托霉素的产量比分批发酵提高了1.39倍。研究了补加氨基酸对达托霉素发酵的影响,结果表明:L-Trp及L-Asp具有前体的作用,能够刺激达托霉素的合成;在发酵初期添加1/L的L-Trp使达托霉素产量提高了近2.5倍;在对数生长期(24h)添加1.75g/L的L-Trp,达托霉素产量达到160.23mg/L,与不添加氨基酸相比提高了3.6倍。
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