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背景和目的:众多研究均提示线粒体在控制细胞死亡中起重要作用,凋亡早期时线粒体膜通透性即可发生变化。已有学者报道,与Calcein-AM共同孵育的细胞,其线粒体基质能被Calcein特异性荧光染色,而胞质中的Calcein荧光可被Co2+猝灭。此种特异性阳性染色要求线粒体内膜功能(通透性)完整,以便作为屏障将胞浆内Co2+与线粒体基质内的Calcein隔开。本实验旨在利用此原理建立一种新的检测细胞早期凋亡的方法并论证其可行性。方法:将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)与Calcein-AM及Cocl2共同孵育染色,再经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导凋亡发生,用流式细胞仪检测凋亡诱导后不同时间点Calcein荧光(FL1)的变化。结果:(1)不同凋亡诱导方式下,诱导后培养一定时间,Calcein荧光(FL1)低信号区域均比相应对照增多;(2)同种诱导方式下,随着诱导后培养时间的延长,Calcein荧光(FL1)低信号区域逐渐增多;(3)同种诱导方式及诱导后培养时间下,随着诱导因素强度的增加,Calcein荧光(FL1)低信号区域增多。结论:Calcein-AM可以作为一种敏感的活细胞染料,用于流式细胞术中检测早期凋亡。目的:比较Calcein-AM与Annexin V用于流式细胞仪检测活细胞早期凋亡时的敏感性,以建立一种新的检测早期凋亡的方法。方法:将人类急性T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)经喜树碱(CPT)、紫外线(UV)诱导后,分别采用Calcein-AM及异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V)进行标记,然后用流式细胞术分析凋亡率,通过比较凋亡诱导后不同时间点的凋亡率来分析Calcein-AM和Annexin V对于检测细胞早期凋亡的敏感性。结果:在喜树碱诱导模型中,加药后2小时即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而3小时后才能用Annexin V检测到;在紫外线诱导模型中,照射后1小时即可用Calcein-AM检测到明显的细胞凋亡,而要在2小时后才能用Annexin V检测到。结论:Calcein-AM用于检测活细胞早期凋亡比Annexin V更为敏感,是一种稳定、可靠、灵敏度高并且十分经济的检测早期凋亡的活细胞染料。