皱纹盘鲍、黑足鲍及杂交F1代线粒体基因组测序及系统发育价值的研究

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通过测定皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino、黑足鲍H.iris Martyn及杂交F1代线粒体基因组序列,发现这三个鲍线粒体基因组结构相似,杂交F1代与母本皱纹盘鲍序列相似度较高,证明杂交F1代具有母系遗传的特点。通过总结腹足纲的线粒体基因组序列特点,探究腹足纲线粒体重排与腹足纲系统发育的关系,利用邻接法(Neighbor-Joing,NJ)以线粒体蛋白质编码基因序列为基础重建了腹足纲的系统发育树,并以此在腹足纲的分类上提出相关建议。本项研究包括以下两部分:  1.采用高通量测序技术测定了皱纹盘鲍、黑足鲍及杂交F1代线粒体基因组序列,为GenBank中鲍科增加了3条线粒体全序列。三条序列总长度分别为16,716bp,17,131bp,16,719bp,编码37个典型的线粒体基因,没有发现在双壳纲中存在的基因缺失或增加的现象,基因结构与已测定的鲍科物种一致。全序列和蛋白质编码基因的碱基组成上都存在A+T偏好性,tRNA二级结构中存在缺失和不稳定现象,证明鲍科物种的线粒体结构和组成存在高度保守性。序列相似性上,黑足鲍与已测定线粒体基因组的鲍属其它物种的相似度较低,均小于85%,说明黑足鲍与已测定线粒体基因组的鲍属其它物种的亲缘关系较远,杂交F1代的碱基组成与皱纹盘鲍相近,与其母代序列相似度最高,高达99.4%,表明杂交F1代线粒体遗传为母系遗传。皱纹盘鲍、黑足鲍及杂交F1代线粒体控制区没有被完全测定出来,但在黑足鲍的控制区发现了6段AT串联重复区域,与黑唇鲍中的AT串联重复区域存在数量和位置上的差异,可能为鲍科种间鉴定提供新的分子标记。  2.比较分析了GenBank中腹足纲现有物种的线粒体基因排序情况并利用13个蛋白质编码基因的碱基序列重建了腹足纲的系统发育关系,发现笠形腹足类(Patellogastropoda),古腹足类(Vetigastropoda),新生腹足类(Caenogastropa),异鳃类(Heterobrachia)这4个分类单元各自清楚地聚为一个单系群,与目前Bouchet和Rocroi提出的腹足纲分类情况一致,但是在这4个支系内部的分类存在偏差,例如新生腹足类中的Vermetoidea总科,从基因排序可以看出Vermetoidea总科与新生腹足类其它物种差异明显,在重建的系统发育树中也单独组成一个支系,建议将其提高至与Littorinimorpha同一级别。Eupulmonata中的Stylommatophora单独聚为一个支系。从本研究可以推断出Stylommatophora与Eupulmonata的其它物种相比分化时间较早,Stylommatophora应该从Eupulmonata中单独分离出来,组成一个同等级的分类单元。目前,仁螺总目和蛋形目的线粒体基因组序列尚未有见测定,笠形腹足类只有一个物种的线粒体基因组得到测序,还需要加强对这三个支系的线粒体基因组测序,以完善腹足纲的系统发育关系,为今后更加全面的研究腹足纲的分类提供可靠的依据。
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