磷是植物生长发育所必需的营养元素,同时也作为限制农林生产的关键因素。土壤有效磷的匮乏,严重制约林业产量的提升,发掘与利用植物耐低磷相关基因,创制磷高效利用新种质是解决上述问题最佳途径。马尾松作为我国重要的经济树种,在农林经济上有着重要的价值,南方土壤有效磷缺乏严重影响马尾松的经济产量,因此挖掘低磷胁迫响应的关键基因具有重要的意义。在前期工作基础上,本文以马尾松耐低磷种质为材料,利用RT-PCR与荧光定量PCR对低磷胁迫响应MYB转录因子进行筛选,采用RACE方法克隆了应答低磷胁迫的MYB转录因子(PmMYB169)全长序列,并进一步探讨其时空表达特性,在此基础上,构建了表达载体。研究结果对深入理解马尾松耐低磷的分子机制,以及通过基因工程创制耐低磷新种质具有重要意义。主要研究结果如下:1.采用RT-PCR方法,从3种内参基因(UBC、GAPDH和18s rRNA)中筛选出最适合的内参基因UBC与GAPDH。通过RT-PCR与荧光定量PCR相结合的方式,从基因表达水平上阐述了4个MYB转录因子在低磷胁迫中表达情况。MYB158在整个低磷胁迫中表达量持续下调;MYB233和MYB312在低磷胁迫下整体表达量不稳定,呈现波动趋势;MYB169表达量在整个低磷胁迫中持续上调。2.利用RACE技术,克隆出MYB169全长序列,命名为PmMYB169。序列分析表明,PmMYB169全长共1407 bp;完整开放阅读框ORF大小为927 bp,非翻译区5’-UTR大小为187 bp,非翻译区3’-UTR大小为293 bp,共编码308个氨基酸。3.生物信息学分析表明,PmMYB169蛋白序列中存在MYB家族结构区域,属于R2R3类MYB转录因子;同源性分析表明,PmMYB169在MYB家族保守区域上同源性较高,它与裸子植物北美云杉亲缘关系最接近。4.组织特异性表达分析发现,PmMYB169为组成型表达,在根、茎、叶中均有表达,叶中表达量最高,根中次之,茎中最低。在根和茎中,36 d的表达量最低,60 d的表达量最高;而在叶中,24 d的表达量最低,60 d的表达量最高;表达量均呈现上升-下降-上升的趋势。5.为进一步探讨PmMYB169的功能,构建了PmMYB169的表达载体pCAMBIA1301-PmMYB169,为下一步工作奠定了基础。