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目的:随着细菌耐药现象的日渐严重,碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)越来越多的在临床中被发现。替加环素(Tigecycline,TGC)是一种新型的抗生素,也是目前极少数能够有效治疗CRKP的抗菌药物之一。自TGC应用于临床以来,陆续出现TGC耐药的CRKP的相关报道。本研究为了了解CRKP对TGC以及其他常用抗生素的耐药情况,了解TGC不敏感的CRKP对耐药基因acrA、acrB、tolC、oqxA、oqxB、tetX、tetX1、tetX2基因的携带情况。方法:取保存于中国医科大学附属第一医院微生物室中的收集于2016年1月至2017年6月的临床分离的40株非重复CRKP。用全自动微生物分析系统BD Phoenix 100测定CRKP的对临床常用药物的耐药性。用MTS法、BMD法、全自动微生物分析系统BD Phoenix 100、纸片法检测CRKP对TGC的耐药性。通过诱导,获得TGC耐药的CRKP,应用PCR技术检测TGC不敏感的CRKP对tetX、tetX1、tetX2、acrA、acrB、tolC、oqxA、oqxB基因的携带情况。结果:1.CRKP对阿米卡星、环丙沙星、左旋氧氟沙星、诺氟沙星、氨曲南的敏感率低于10%,对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他定、头孢西丁、头孢曲松、头孢呋辛、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素、呋喃妥因敏感率为0,对复方新诺明的敏感率低于50%。2.四种方法检测对TGC的耐药性,结果显示MTS不敏感率为5.00%,MIC范围为0.19-2ug/ml;BMD不敏感率为7.50%,MIC范围为0.25-2ug/ml;BD Phoenix 100不敏感率为100.00%,MIC范围为2-4ug/ml;纸片法不敏感率为10.00%。BD Phoenix 100、纸片法的结果与MTS法的结果相比,P<0.05,差异有统计学意义。而BMD法与MTS法的结果相比,P>0.05,差异无统计学意义。3.对两株TGC不敏感的CRKP诱导,诱导1周后,MIC即为4ug/ml,转变为耐药菌株。诱导结束后的菌株行纸片法药敏试验可见,13号菌和25号菌的诱导株(三个重复菌株)抑菌圈均消失,13号原始菌株抑菌圈直径16mm,25号原始菌株抑菌圈直径20mm。4.PCR扩增产物电泳条带图可见acrA和acrB在4株菌中均有条带显示,且条带位置与目标产物的大小基本一致,表明两种基因在4株菌中是阳性的,oqxA、oqxB、tolC、tetX、tetX1、tetX2均无条带显示,表明此4株菌没有此六种基因的携带。将产物测序结果输入NCBI数据库比对,显示,acrA和acrB与目标基因的相似度分别是97%与99%。结论:1、CRKP对临床常用抗菌药物的敏感性极低,但对TGC的敏感性较高,TGC可作为治疗CRKP的首选药物。2、用纸片法和自动化仪器测定TGC敏感性时,敏感结果可直接报告,若出现不敏感结果,建议用MTS法或BMD法进行结果的复核。3、在体外,低浓度的TGC连续刺激可诱导CRKP对TGC的MIC持续增高。4、acrA、acrB与TGC耐药可能有相关性。