【摘 要】
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研究RV、HRV及IBDV三种传染性RNA病毒鸡卵黄抗体(IgY)的产生、分离制备及以ELISA为主的定性定量检测,为IgY替代哺乳动物血清IgG作为免疫检测诊断试剂奠定基础,同时IgY还可用
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研究RV、HRV及IBDV三种传染性RNA病毒鸡卵黄抗体(IgY)的产生、分离制备及以ELISA为主的定性定量检测,为IgY替代哺乳动物血清IgG作为免疫检测诊断试剂奠定基础,同时IgY还可用于被动免疫和疾病的防治.以三种病毒分别免疫120日龄健康母鸡,RV及HRV用50μg抗原液/只鸡添加等量CFA首免,IBDV疫苗5倍剂量饮水首免,以后每隔10天胸肌注射加强免疫,连续3次.三种抗原产生了ELISA效价分别为1:9600,1:3600,1:4800的相应IgY抗体.同时用建立的IBDV的免疫程序免疫1 80日龄鸡,仍可产生高效价卵黄抗体.三种IgY的产生进程曲线相似,即在二免后卵黄中IgY效价开始上升,第四次免疫后,效价达到最高并维持三个月.每次加强免疫后第2、3天,由于抗原中和作用IgY效价持平或略有降低,而后增加.建立和优化了IgY的间接ELISA检测条件.选用水稀释-微滤法去脂,优化后的条件.应用三种RNA病毒免疫健康母鸡,建立了相应IgY的间接ELISA检测力法和免疫程序,获得了高效价免疫蛋.其中抗RV的IgY国内尚未见报导.通过分离纯化得到了电泳纯IgY.该方案条件温和,抗体活性损失小.所得IgY可进一步用于相应传染病的诊断检测和防治应用研究.
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