【摘 要】
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肝脏具有强大的合成、分泌、解毒等特异功能,是人体重要的器官。我国肝衰竭的死亡率极高,目前治疗肝衰竭的有效方法是为肝衰竭患者提供一个在体外进行肝功能支持的生物人工肝装置。本课题旨在研究生物人工肝中肝细胞培养所需的微载体制备工艺,制备出性能良好的微载体,为临床上肝衰竭治疗奠定基础。本文第二章采用滴加法,以海藻酸钠为基料,氯化钙溶液为成球剂及交联剂制备海藻酸钠微载体。采用控制变量法,逐一探讨了海藻酸钠浓
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肝脏具有强大的合成、分泌、解毒等特异功能,是人体重要的器官。我国肝衰竭的死亡率极高,目前治疗肝衰竭的有效方法是为肝衰竭患者提供一个在体外进行肝功能支持的生物人工肝装置。本课题旨在研究生物人工肝中肝细胞培养所需的微载体制备工艺,制备出性能良好的微载体,为临床上肝衰竭治疗奠定基础。本文第二章采用滴加法,以海藻酸钠为基料,氯化钙溶液为成球剂及交联剂制备海藻酸钠微载体。采用控制变量法,逐一探讨了海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、滴加用具等因素对海藻酸钠微载体的影响,当海藻酸钠浓度为5%,CaCl2浓度为15%,搅拌速度为100 rpm,使用0.5 mL注射器进行滴加实验得到的海藻酸钠微载体硬度高,球型规整,粒径均一,分散性良好,密度适中,平均粒径在1000 μm左右,含水量为90.04%。扫描电镜图显示微载体表面有许多凸起和凹陷结构。本文第三章采用乳化法,以壳聚糖、海藻酸钠为基料,乳化剂为Span-85,油相为液体石蜡,交联剂为CaCl2制备壳聚糖/海藻酸钠微载体。采用控制变量法,逐一探讨了基底溶液浓度、乳化剂的用量、水油体积比及乳化速度等因素对壳聚糖/海藻酸钠微载体的影响,当海藻酸钠浓度为1%,壳聚糖浓度为5%,Span-85用量为4mL,水油体积比1:4,搅拌速度为900 rpm,得到的壳聚糖/海藻酸钠微载体硬度高,球型规整,粒径较为均一,分散性良好,密度适中,平均粒径在300 μm左右,粒径大小适合于肝细胞培养。扫描电镜图表明微载体表面呈珊瑚状,质地蓬松,有利于细胞黏附在其表面;常规的121℃ 30 min的高温高压灭菌实验中,该微载体不能保持其良好的球型结构,经过PBS缓冲溶液浸泡后吸水膨胀明显。本文第四章对壳聚糖/海藻酸钠微载体其进行化学改性。其一,加入100 mL 0.1%CaCl2和5 mL环氧氯丙烷进行化学交联;其二,在微球上引入半乳糖基;其三,添加10 mL正戊醇,0.25 g醋酸铵进行致孔处理。常规的121℃30 min的高温高压灭菌实验中,该微载体能保持其良好的球型结构;能在中、碱性溶液中保持其球型30天,稳定性良好;能在搅拌悬浮条件下保持其球型状态24天,机械强度强;扫描电镜图表明微载体表面呈珊瑚状,质地蓬松,出现了明显的孔洞结构,孔径在20-30μm左右,且相互之间连通;肝细胞培养实验证明肝细胞能顺利在微载体上面进行贴壁生长和繁殖。
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