藏药“榜间嘎保”((?)),即白花龙胆,为大宗常用藏药材,临床上用于治毒病,各种热症,喉炎热闭。为十五味龙胆花丸、二十五味龙胆花丸等经典藏成药的君材,疗效确切。本研究针对其来源复杂,分类混乱,现代藏医药学著作及国家、地方标准收载的品种不一致,质量控制方法简单,缺乏内在质量评价的标准,临床使用缺乏科学依据等问题,采用文献分析、实地调查、生药研究、化学成分分析、药效评价相结合的方法,对藏药“榜间嘎保”进行了系统的品种整理及主流品种的质量研究,得到如下结果。1对白花龙胆进行了系统的文献整理,为其临床使用及合理的开发利用提供一手资料。本文首次发现藏药“榜间嘎保”最早记载于《月王药诊》,更正了藏医药专著《中华本草·藏药卷》等文献中有关其始载于《四部医典》的错误提法。梳理了藏本草及相关文献记载做“榜间嘎保”使用的品种,对其中的品种归并、命名异议的问题做了分析。最终整理文献记载的白花龙胆基原植物达7种,1变种。弄清了印度佛经典籍及藏医学对“榜间嘎保”的功效主治及用法,并总结了70余首含白花龙胆的经典藏成药方,有2/3的藏成方临床上主要用于呼吸系统疾病的治疗。2对白花龙胆的商品及使用现状进行了深入的调查走访,厘清了其商品的主流品种和使用情况。根据调查走访,结合文献查考,本文认为大花龙胆Gentiana szechenyii Kanitz最接近古藏本草描述,其次是高山龙胆G. algida Pall.“无茎”植株称为“榜间嘎保琼哇(小花)”均为标准收载的品种。前者在药材市场上广泛流通,藏药厂广泛使用。后者与高山龙胆“有茎”植株、岷县龙胆G. purdomii Marq.均被藏医指认为白花龙胆,主要为地方藏医院、藏医生自采用。短柄龙胆G. stipitata Edgew.在四川阿坝州、西藏昌都、青海部分地区做白花龙胆使用,且被一些藏药图典收载。条纹龙胆、云南龙胆、瘦华丽龙胆植株形态与古藏本草描述出入较大,未见商品及藏医院、乡镇藏医使用,或为地方习用品。云雾龙胆为《中华藏本草》等著作收载,其描述与《中国植物志》描述有出入,或为误定。以上品种未见商品药材流通。另在白花龙胆商品药材中发现有麻花秦艽、蓝花龙胆等的混入,部分藏药厂用蓝花类龙胆代替白花龙胆使用。3对四川藏区白花龙胆的基原植物及龙胆属药用植物进行了资源调查,为其资源保护、合理开发与利用提供参考依据。配合第四次全国资源普查,本文对四川藏区白花龙胆的基原植物及龙胆属药用植物进行了调查,结果表明,共有龙胆属药用植物28种,其中,涉及白花龙胆基原植物5种(6个类型),即大花龙胆G. szechenyii Kanitz、高山龙胆G. algida pall.“无茎”植株、高山龙胆G. algida Pall.“有茎”植株、岷县龙胆G. purdomii Marq.、短柄龙胆G. stipitata Edgew.、条纹龙胆G. striata Maxim.,尚有粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie、麻花秦艽G. straminea Maxim.、蓝玉簪龙胆G. veitchiorum Hemsl.、华丽龙胆G. sino-ornata Balf等具有重要的药用价值。其分布较广,资源丰富,具有良好的开发与利用前景。4白花龙胆主流品种的品质研究4.1首次对不同基原的白花龙胆品种进行了形态组织学系统研究,找出了其原植物、药材性状及显微特征上的异同,为其品种鉴定提供了参考依据。原植物形态上,主要从根的形状大小,茎生叶的着生方式及形状,花的大小形状、花冠的颜色斑点的有无等方面进行鉴别。药材性状上,主要从花冠、花萼的形状、叶子的形状及着生方式、花萼裂片及叶片边缘等方面进行鉴别。显微特征上,主要从花枝的茎中部横切面内皮层明显与否、皮层与半径之比,花冠内表面,药材粉末导管类型及草酸钙晶体的类型等方面进行鉴别。不同基原的白花龙胆花粉粒和种皮的扫描电镜观察结果表明,花粉粒的表面纹饰和种皮的Ⅱ级纹饰可为种的鉴定提供参考。4.2建立了白花龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的薄层色谱鉴别方法及异荭草苷和异牡荆苷的薄层色谱鉴别方法,对不同基原白花龙胆进行了薄层色谱鉴别,并与蓝花龙胆(蓝玉簪龙胆、华丽龙胆)、麻花秦艽(伪品)进行了比较,找出了其异同,为分析其化学成分的差异提供了参考依据。建立的薄层色谱鉴别方法分离效果较好,色谱斑点多而清晰,Rf值适中。通过对不同基原的白花龙胆、蓝花龙胆、麻花秦艽进行薄层色谱对比鉴别,结果表明,高山龙胆“无茎”植株、高山龙胆“有茎”植株、岷县龙胆、蓝玉簪龙胆、华丽龙胆、麻花秦艽供试品色谱中,在与龙胆苦苷、獐牙菜苦苷对照品色谱相应位置上显相同的荧光淬灭斑点,而大花龙胆、短柄龙胆则无此斑点；上述不同品种间的色谱斑点数目、大小及颜色深浅有区别。从异荭草苷和异牡荆苷薄层色谱鉴别结果看,除条纹龙胆、麻花秦艽外,其余品种的供试品色谱中,在与异荭草苷、异牡荆苷对照品色谱相应位置上均显黄色荧光斑点,但不同品种间的色谱斑点的数目、大小和颜色深浅有区别。上述结果提示了不同品种间化学成分的差异。4.3运用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)对不同基原的白花龙胆、蓝花龙胆及混伪品进行了鉴别研究,建立了其红外特征光谱,找出不同品种之间的区别,认为二阶导数红外光谱能区别近似种。4.4首次建立了白花龙胆的HPLC指纹图谱鉴别方法,应用主成分、聚类分析等方法对白花龙胆、蓝花龙胆、及混伪品共62批样品进行了对比分析。结果表明,不同品种、同一品种不同植株部位及不同存放时间样品的指纹图谱在色谱峰的数目、峰面积上差异较大。大花龙胆与短柄龙胆相似度较高；高山龙胆“无茎”植株、高山龙胆“有茎”植株无明显差异,与岷县龙胆相似度高。通过统计分析,大花龙胆、短柄龙胆聚为一类,高山龙胆“无茎”植株、高山龙胆“有茎”植株与岷县龙胆聚为一类。蓝花类龙胆聚为一类,与高山龙胆、岷县龙胆距离较近,与大花龙胆、短柄龙胆距离较远。且大花龙胆、短柄龙胆的地上部分与地下部分的距离较远,揭示同一品种不同部位化学成分差异较大。另,同一品种不同存放时间的样品距离也较远。4.5按《中国药典》第一部(附录ⅨH第一法)及(附录ⅨK)方法,进行了不同基原白花龙胆共43批样品的水分、总灰分及酸不溶性灰分的测定,结果表明,水分最高10%,最低为6%,平均为7.82%；总灰分最高为7.1%,最低为3.5%,平均为5.4%；酸不溶性灰分最高为3.8%,最低为0.6%,平均为1.71%。为其限量标准的制定提供了参考依据。4.6建立了白花龙胆浸出物测定方法,以70%7,醇为溶剂,热浸法测定。根据43批不同基原白花龙胆样品的测定结果,最高为38.25%,最低为21.98%,平均29.73%；整体看以短柄龙胆的浸出物含量稍高。4.7首次建立了HPLC同时测定白花龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、异荭草苷、异牡荆苷4种化学成分含量的方法,并对43批不同基原、不同存放时间的白花龙胆样品进行了含量测定,结果表明,大花龙胆、短柄龙胆的异牡荆苷含量均明显高于异荭草苷,而龙胆苦苷、獐牙菜苦苷未检出。高山龙胆、岷县龙胆的龙胆苦苷、异荭草苷含量明显高于獐牙菜苦苷、异牡荆苷。条纹龙胆的4种化学成分含量均较低。存放时间久的样品4种化学成分普遍较低。5结合藏药“榜间嘎保”的藏医功效及临床用法,首次对大花龙胆、高山龙胆、短柄龙胆、蓝玉簪龙胆(蓝花龙胆)及十五味榜间丸(藏成药)进行了药效学对比研究,为其临床应用提供了科学依据。体内抗菌实验结果表明,以雌性小鼠抗菌实验看,十五味榜间丸、短柄龙胆、蓝玉簪龙胆显示了较好的抗菌作用。结合雄性小鼠抗菌实验看,大花龙胆亦显示了较好的抗菌效果。总体上,十五味榜间丸效果最好,其次是短柄龙胆、大花龙胆、蓝玉簪龙胆。对小鼠慢性支气管炎的影响实验结果表明,十五味榜间丸、高山龙胆、蓝玉簪龙胆的高低剂量组均能够提高小鼠肺组织中SOD的活力和明显降低小鼠肺组织中TNF-a和IL-10的水平,对小鼠慢性支气管炎模型显示出较好的治疗效果,而大花龙胆、短柄龙胆的作用不明显。6通过本文研究,为藏药“榜间嘎保”的品种来源及规范化质量标准的制订提供了参考依据,为其资源的可持续利用与开发奠定了基础。研究发现,目前大花龙胆为商品流通的主流,最接近古藏本草描述。短柄龙胆有少量的商品药材,高山龙胆、岷县龙胆在一些藏医院、藏医生自采用。条纹龙胆仅在《藏药志》中收载。品质评价研究结果表明,大花龙胆与短柄龙胆较为相似,高山龙胆与岷县龙胆较为相似,高山龙胆“无茎”植物与高山龙胆“有茎”植株无明显差异。条纹龙胆与前5者差异较大。综合本文研究结果及使用习惯、资源状况,建议暂作白花龙胆使用的品种为大花龙胆、短柄龙胆、高山龙胆、岷县龙胆。