研究背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种自身抗体产生和多器官损害为特征的自身免疫性疾病,其临床表现复杂,病程迁延反复,对患者身心健康造成较大影响,已成为一个重要的公共卫生问题。已有研究表明SLE的发生与T、B淋巴细胞的高度活化、免疫球蛋白增多等机体的免疫异常有关,其中以B细胞增殖分化和功能异常最为突出。B细胞通过产生大量的自身抗体介导组织和器官损伤,递呈抗原给自身反应性T细胞,以及产生可溶性介质触发、维持炎症反应,参与SLE发病机制的多个环节。核转录因子κB(nuclear factorκB,NF-kB)是参与细胞内信号转导的重要转录因子,对T细胞的活化、增殖以及调节B细胞免疫球蛋白基因的表达起着关键作用。已有证据显示,B细胞受体(B cell receptor,BCR)介导的NF-kB信号通路的激活参与了SLE的发病。蛋白激酶C(protein kinase Cβ,PKCβ)是BCR介导的NF-kB信号通路中的关键因子,可以通过BCR介导的NF-kB信号通路的激活,对成熟B细胞的存活起重要作用。B淋巴细胞瘤x L(B-cell lymphoma x L,Bcl-x L)和B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)是Bcl-2蛋白家族的两个成员,均具有抑制细胞凋亡的作用。已有研究表明NF-kB可以诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L等表达失调,PKCβ缺陷的B细胞存活时间短也与Bcl-2、Bcl-x L的表达失调有关。同时,Bcl-2、Bcl-x L还可以通过影响B细胞功能造成大量自身免疫性抗体堆积,参与SLE的发病过程。目前已有在中国华中、华南地区4199例SLE病人和8255例健康对照中的研究表明,PKCβ基因多态性位点rs16972959与SLE遗传易感性相关,但缺少在皖籍汉族人群中的报道,且未研究rs16972959基因频率与SLE相关临床表现、实验室指标等疾病特征之间的关系。因此,本研究拟分析皖籍汉族SLE患者及健康对照者PKCβ基因多态性位点rs16972959与SLE遗传易感性之间的关联。同时,采用ELISA方法检测SLE患者和健康对照中PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平,比较两组间差异,探讨三者血浆表达水平之间的关系,并结合临床特征,分析PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平与SLE疾病活动度及不同临床表现和实验室指标之间的关系。第一部分蛋白激酶Cβ基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究目的比较SLE患者和健康对照PKCβ基因单核苷酸多态性位点(rs16972959)基因型和等位基因频率的差异,探讨其与SLE遗传易感性的关系。同时结合临床特征,分析其与SLE主要临床表现和实验室指标之间的关系。方法本研究共纳入SLE病例400例,均来自安徽医科大学第一附属医院和附属省立医院风湿免疫科,诊断标准符合美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准。纳入健康对照400例,来自安徽医科大学第一附属医院健康体检中心健康志愿者。采用Taq Man探针基因分型技术检测SLE病例组和健康对照组PKCβ基因位点rs16972959的基因型和等位基因频率,结果采用SPSS 10.01软件进行统计分析,使用χ2检验或确切概率法比较SLE病例组和健康对照组基因型和等位基因频率的分布差异。检验水准α=0.05。结果(1)哈迪-温伯格检验:对照组基因分型的结果符合哈迪-温伯格平衡(χ2=1.523,P=0.217)。(2)PKCβ(rs16972959)基因分型:SLE患者组rs16972959位点基因A/A,A/G和G/G的基因型频率分别为3.75%,33.75%和62.50%,对照组分别为8.00%,36.75%和55.25%,两组基因型的分布差异具有统计学意义(χ2=13.816,P<0.001)。对两组间等位基因频率进行比较发现,PKCβ-34277227A/G(rs16972959)最小等位基因A的基因频率在SLE病例组和对照组间分别为20.63%和26.37%,差异具有统计学意义(χ2=7.356,P=0.007)。(3)基因分型与主要临床症状的关联:rs16972959基因位点A/A,A/G和G/G的基因型分布与蝶形红斑、盘状红斑、光敏感、口腔溃疡、关节炎、浆膜炎、肾脏病变和血液学异常均无统计学关联(均有P>0.05)。(4)基因分型与主要实验室指标的关系:rs16972959基因位点A/A,A/G和G/G的基因型分布与抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体和抗核糖核蛋白抗体之间均无统计学关联(均有P>0.05)。而rs16972959基因型分布在抗核糖体P蛋白抗体阳性组和阴性组之间的差异有统计学意义(χ2=6.361,P=0.042)。结论该研究人群中PKCβ基因单核苷酸多态性(rs16972959)与SLE的遗传易感性有关,rs16972959位点的G等位基因与该人群SLE的发病风险升高有关。第二部分蛋白激酶Cβ血浆表达水平与系统性红斑狼疮发病的相关性研究目的比较SLE病例组与健康对照组、SLE肾炎组与非肾炎组以及活动期SLE病例与非活动期SLE病例之间血浆PKCβ,Bcl-x L和BCL-2表达水平的差异,分析PKCβ,Bcl-x L和BCL-2表达水平之间的相关性以及三者表达水平与SLE临床表现和实验室指标之间的关系。方法选取80例安徽医科大学第一附属医院和附属省立医院风湿免疫科确诊的SLE患者作为病例组,收集一般情况、临床资料和实验室资料。所有的患者均符合1997年修订的SLE分类标准。选取80例安徽医科大学第一附属医院健康体检中心健康志愿者作为对照组,收集一般情况资料。采用ELISA试剂盒分别检测PKCβ、Bcl-x L和BCL-2的血浆表达水平。采用两独立样本t检验比较分析病例组与对照组PKCβ、Bcl-x L和BCL-2血浆表达水平之间的差异。使用SPSS 10.01软件进行统计学分析,检验水准α=0.05。结果(1)SLE病例组和健康对照组血浆中PKCβ的表达水平差异无统计学意义(t=0.62,P=0.535);SLE病例组Bcl-x L血浆表达水平低于对照组,差异有统计学意义(t=6.00,P<0.001);Bcl-2在SLE病例组中的血浆表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=2.18,P=0.031)。(2)SLE病例组和对照组血浆中PKCβ表达水平与Bcl-x L和Bcl-2表达水平之间均无统计学关联(均有P>0.05),SLE病例组中Bcl-x L与Bcl-2血浆表达水平之间也无统计学关联(rs=0.035,P=0.820),而对照组Bcl-x L与Bcl-2血浆表达水平呈负相关(rs=-0.342,P=0.007)。(3)SLE相应临床表现阳性组与阴性组之间PKCβ、Bcl-x L和Bcl-2血浆表达水平差异均无统计学意义(均有P>0.05)。(4)SLE不同实验室指标与PKCβ和Bcl-2血浆表达水平之间均无统计学关联(均有P>0.05);Bcl-x L血浆表达水平与C4、Ig G、Ig M之间具有统计学关联(P1=0.041,P2=0.024,P3=0.019),与其他各实验室指标之间均无统计学关联(均有P>0.05)。结论SLE病例组和健康对照组血浆中PKCβ的表达水平差异无统计学意义,SLE病例组Bcl-x L血浆表达水平低于对照组,SLE病例组Bcl-2血浆浓度高于对照组,差异均有统计学意义。