论文部分内容阅读
背景前期发现L-精氨酸(L-Arg)与一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)分别对大鼠进行预处理,24h后能诱导出第二窗心肌保护作用(SWOP),减轻离体心脏缺血再灌注损伤(IRI);随后分别在L-NAME预处理前及预处理后的复灌液中加入腺苷(Ado)受体抑制剂DPCPX,该保护作用均被阻断,证明Ado可能与该保护作用相关。Ado作为缺氧状态下的反应产物,受低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的调节,在IRI中能抑制促凋亡因子Bax介导的Caspase-3活化的凋亡信号通路的激活,减轻细胞凋亡;但L-NAME与L-Arg预处理的保护作用是否涉及上述机制尚未明确。目的1.探讨L-NAME与L-Arg预处理产生的SWOP是否与改变内源性Ado的水平相关;是否对HIF-1α的表达产生影响。2.明确L-NAME与L-Arg预处理的作用是否干预Bax及caspase-3作用的凋亡通路,影响IRI后的心肌细胞凋亡。3.探究L-NAME以及L-Arg预处理对心肌保护作用的差异。方法选取24只8-10周的雄性SD大鼠随机分为三组(n=8),分别经腹腔注射相应药物进行预处理:L-NAME组(10mg/kg),L-Arg组(500mg/kg),Control组(生理盐水3.3ml/kg);预处理24h后留取血样用高效液相色谱仪检测血浆Ado浓度;同时建立离体心脏IRI模型,心脏稳定跳动15min后,通过灌注4℃改良停跳液使心脏于20℃冷缺血1h,其后复温灌注2h;记录缺血前、复灌后1、60、120min(R1、R60、R120)各个时间点血流动力学指标:心率(HR)、左室发展压(LVDP)、冠脉流量(CF)。灌注末取心脏行TTC及HE染色评估梗死情况、免疫组化分析Bax表达,RT-PCR检测心肌中HIF-1α及Caspase3的mRNA水平。结果停跳前各组血流动力学指标无差异,在复灌的全过程L-NAME组能较好地恢复LVDP及CF(P<0.05);L-Arg组在复灌早期(R1,R60)亦能较好的保护心功能,但灌注后期(R120)CF快速下降与Control组无差异(P>0.05);而复灌前后各组间心率变化无明显差异。各组血浆中Ado浓度无显著性差异(P>0.05)分别为:L-NAME组84.121±29.533μg/L,L-Arg组80.670±17.170μg/L,Control组83.756±24.979μg/L。TTC染色显示L-NAME组及L-Arg组在对比梗死面积方面相当(23.50±4.51%VS 29.05±5.83%),但较 Control 组(40.55±6.16%)明显减少梗死面积(P<0.05);HE染色切片下Control组心肌形态结构损伤较其余两组重。免疫组化方面,L-NAME组Bax的减少程度较L-Arg组明显(P<0.05),且两组的凋亡相关蛋白均较Control组明显减少(P<0.05)。对比Control组,L-NAME与L-Arg预处理均能减少IRI后心肌Caspase-3的表达,但只有L-NAME组能引起HIF-1α表达增多(P<0.05)。结论1.通过L-NAME预处理能产生第二窗心肌保护作用,减少缺血再灌注后心肌的梗死面积、改善心功能及细胞形态,其机制可能涉及抑制Bax及Caspase-3作用的凋亡信号通路激活,上调HIF-1α表达相关。2.L-Arg预处理也能产生一定的保护作用,但较L-NAME预处理作用稍弱,两者间的作用机制存在差异,HIF-1α可能在其中具有重要作用。3.两者预处理对24h后血浆Ado浓度影响不明显,需进一步完善检测技术及建立多时间点动态监测预处理24h内腺苷水平的变化。