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研究目的:
本研究利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavyionresearchfacilityinlanzhou,HIRFL)产生的30keV/μm、80keV/μmLET的12C离子束和甘肃省肿瘤医院X射线机产生的X射线,对人肝癌细胞SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702进行辐照,研究辐照后细胞存活情况和端粒酶活性变化,探讨细胞存活与端粒酶活性的关系,以期说明端粒酶活性水平能否反映细胞存活情况以用作放疗效果评估的指标,为端粒酶在肿瘤诊断、肿瘤治疗、放疗效果评估中的应用,以及重离子肿瘤治疗等提供基础数据。
材料与方法:
实验以2Gy/min的剂量率,在1,2,3,4Gy四个剂量点处对人肝癌细胞SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702进行30keV/μm、80keV/μmLET的12C离子束和X射线照射。辐照后,以细胞克隆形成法测定细胞存活,多聚酶链式反应银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP-PCR)检测端粒酶活性变化。电泳凝胶图像借助Bandleader和BandScan软件进行去噪处理和端粒酶活性灰度值测定,并对端粒酶活性进行定量,以Oigin软件作图。
结果:与结论:
结果:显示,X射线和12C离子束辐照后,HL-7702和SMMC-7721两种细胞的存活都随辐照剂量的增加而不断下降。对于X射线,HL-7702细胞端粒酶活性在0 ̄4Gy剂量范围内随辐照剂量增加而依赖性增高。而SMMC-7721在1~4Gy剂量范围内也呈剂量依赖性增强的趋势,但其端粒酶活性在1,2,3Gy处较对照细胞(0Gy)弱,在照射剂量达4Gy时,端粒酶活性则明显增高。对于12C离子束,30keV/μmLET处,0~3Gy剂量范围内,HL-7702和SMMC-7721两种细胞的端粒酶活性均随辐照剂量的增加而不断升高,4Cy时下降。80keV/μmLET处,HL-7702在3Gy时端粒酶活性最高,4Gy时消失;SMMC-7721则在2Gy时端粒酶活性最高,4Gy时端粒酶活性低于对照组(0Gy)。端粒酶活性变化分析可知,高LET射线或离子辐照对细胞端粒酶活性表达影响更大,在低剂量下即可导致端粒酶活性明显变化。
细胞存活与端粒酶活性的相关性分析和线性回归分析结果说明,在X射线和12C离子束辐照条件下,低剂量范围内,HL-7702细胞的存活情况与端粒酶活性变化可能具有线性相关性,而对于SMMC-7721则没有任何相关性,有待进一步研究。我们推测认为,对于某些类型的细胞,其受照后细胞中端粒酶活性水平可能能够反映细胞存活情况,以用作肿瘤细胞放疗效果评估的指标。