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伴随着畜牧业的快速发展,奶牛养殖数量不断增多,受饲养环境与技术的限制,导致奶牛疾病出现上升趋势。其中隐性乳房炎是奶牛场危害最大、投入药费最多、防治最难的疾病之一。研究证明隐性奶牛乳房炎的病原微生物有细菌、真菌、病毒、支原体等,但主要致病菌是大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌,能够占到病例的90%以上,由于常年抗生素滥用与误用,致使病菌产生耐药性,造成治疗效果不甚理想;抗菌肽有着不产生耐药性的优点,能够杀灭细菌、真菌和病毒,部分产品在奶牛乳房炎的治疗中发挥了重要作用,由于未见奶牛血液中性粒细胞抗菌肽对乳房炎主要致病菌的影响报道,所以探索中性粒细胞中抗菌肽的提取物对致奶牛乳房炎细菌抑菌特点,探讨对治疗乳房炎的新方法新药物具有一定的现实意义。 试验首先选择石河子某奶牛场四月份106头泌乳期奶牛的424个乳区,经BMT法诊断该奶牛场隐性乳房炎乳区感染率为47.17%,收集50份阳性乳样进行病原菌的分离鉴定,结果显示:在分离到的细菌112株中,金黄色葡萄球菌分离出50株,占44.64%;大肠杆菌分离出44株,占39.29%;链球菌分离出15株,占13.39%。说明该奶牛场引起奶牛隐性乳房炎感染的主要病原菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。 采集奶牛血液,使用细胞分离液得到奶牛血液中性粒细胞,用5%的乙酸破坏中性粒细胞,冷冻抽干制成抗菌肽的粗制品,然后使用AU-PAGE凝胶电泳方法分离纯化奶牛血液中性粒细胞抗菌肽,并使用试剂盒法和透析袋水平电泳法回收冷冻抽干,得到两种分子量的抗菌肽,即命名为抗菌肽A和抗菌肽B,通过SDS-PAGE法分析测得抗菌肽A的分子量约为6.8KD,抗菌肽B的分子量约为7.1KD。通过对透析袋水平电泳法和page微量蛋白回收试剂盒法回收抗菌肽两种方法进行比较,结果显示:透析袋水平电泳法优于试剂盒法回收,可使每升血液分离纯化出100mg的抗菌肽。 利用琼脂糖扩散试验筛选抗菌肽A和B最佳抑菌浓度和敏感细菌种类,并与常用抗生素抑菌情况进行比较,分析抗菌肽的抑菌情况,结果显示:抗菌肽A在100ug/ml对大肠杆菌抑菌直径达到18.4±2.2mm,与同浓度的硫酸链霉素相一致,对链球菌抑菌直径达到14.3±2.1mm与同浓度的磺胺嘧啶钠的一致;抗菌肽B在100ug/ml对金黄色葡萄球菌抑菌直径为14.1±2.4mm与50ug/ml硫酸庆大霉素的抑菌圈相一致。结果:分离到的中性粒细胞抗菌肽对奶牛乳房炎主要致病菌有不同程度的抑菌作用。