【摘 要】
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关于肿瘤转移机制的报道很多,本课题主要针对Ca2+相关通路,以人成骨肉瘤细胞(MG63)为平台,研究钙调磷蛋白磷酸酶(PP2B)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和LIM激酶(LIMK1)对丝
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关于肿瘤转移机制的报道很多,本课题主要针对Ca2+相关通路,以人成骨肉瘤细胞(MG63)为平台,研究钙调磷蛋白磷酸酶(PP2B)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和LIM激酶(LIMK1)对丝切蛋白磷酸酶(SSH1L)的活性调控,从而观察肿瘤细胞伪叶的形成及细胞迁移能力的变化。本研究将不同方法标记的丝切蛋白磷酸酶重组载体(YFP-SSH1L, Myc-SSH1L等)分别转染到MG63细胞中,并加入Ca2+运输载体A23187,通过共聚焦显微镜和免疫印迹来观察发现5μM的A23187可通过调节钙调磷蛋白磷酸酶(PP2B)的活性,激活SSH1L,促使P-cofilin的水平降低。当用1μM的A23187载体作用MG63细胞时, CaMKII和LIMK1活性达到了最大,同时P-cofilin水平升高,当在高钙环境时(A23187为5μM),CaMKII和LIMK1活性则降至最低。当P-cofilin水平较低时,促进了肌动蛋白(actin)的动力学作用,从而促进细胞的移动和趋化性,诱导骨肉瘤细胞细胞形成伪叶,并且其作用可被PP2B的抑制剂氯氰菊酯(cypermethrin)完全抑制。通过体外激酶测定及SSH1L磷酸酶活性测定实验显示CaMKII可使SSH1L磷酸化,但是对其的2个丝氨酸突变体无作用。这些结果表明Ca2+信号介导PP2B对SSH1L有激活作用,而CaMKII和LIMK1则对SSH1L起着负相调节的作用,通过对这些Ca2+的相关通路的研究有助于揭示骨肉瘤细胞侵袭、转移的机制,并为临床治疗提供了一定的理论基础。
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