葡萄是我国重要的经济水果之一,栽培面积和年产量均居于世界前列。但由于环境及土壤问题,葡萄栽培当前面临较为严重的问题。其中,土壤盐渍化成为限制葡萄栽培的重要因素之一。基因工程是一种有效的育种方式,它能够极大的缩短育种年限。因此,筛选耐盐基因,并研究功能和作用机理对于葡萄耐盐育种具有重要的意义。本研究通过生物信息学鉴定和q RT-PCR分析发现,葡萄且VvTrihelix5转录因子对盐胁迫具有明显的响应作用。关于该转录因子在盐胁迫的响应机理研究目前尚不清楚。因此,本试验通过基因克隆获得VvTrihelix5转录因子,分析该转录因子序列特征及响应耐盐胁迫作用机理,主要研究结果如下:1葡萄Trihelix转录因子家族生物信息学分析结果显示,该家族转录因子27个成员分布于11条染色体上,亚细胞定位预测显示所有转录因子主要定位于细胞核中;关于葡萄,拟南芥和水稻三个物种的进化树分析结果表明,该转录因子家族可分为五个亚族,顺式作用元件结果显示该家族基因启动子前2000 bp包含大量的逆境相关元件,包括茉莉酸甲酯、脱落酸和厌氧诱导元件等;q RT-PCR结果显示,VvTrihelix5、VvTrihelix6和VvTrihelix7转录因子的表达量在200 mmol/L NaCl胁迫下明显上调,分别是对照的7.3、15.4和7.2倍。另外,该家族转录因子还受ABA和PEG胁迫诱导。2通过拟南芥原生质体对Trihelix5-GFP融合蛋白进行亚细胞定位观察,实验结果显示,该基因主要定位于细胞核中,且VvTrihelix5转录因子属于SIP1亚族;对九个物种多序列比对和保守基序分析发现,Motif 1、Motif 2和Motif 4包含整个转录因子的功能结构域,即螺旋-环-螺旋的结构。3将葡萄VvTrihelix5转录因子在番茄中异源表达后,转基因各株系和野生型番茄使用300 mmol/L NaCl分别处理后,在处理144 h时,野生型番茄叶片明显卷曲,通过对不同处理时期野生型和转基因番茄的相对电导率、根系活力、抗氧化物酶活性指标测定,结果显示,该转录因子可能通过激活抗氧化物酶系统活性来提高番茄对盐Micro-Tom番茄对盐胁迫的耐受性。酵母双杂筛选结果表明,VvTrihelix5与VvHAL3A蛋白存在明显互作关系,进一步双分子荧光互补验证显示,这两个蛋白的互作位置可能位于细胞膜上。