NHEs基因在LPS致小鼠腹泻肠管中的表达

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钠/氢交换泵NHEs是存在于真核细胞中的一种重要离子跨膜转运载体,该蛋白载体有多种功能,主要功能有调节细胞内pH、控制细胞体积大小、负责钠/氢离子的转运、调节细胞周期及细胞增殖等多种功能。NHEs活性改变会引起机体Na+吸收障碍,导致腹泻,调节NHEs活性将是预防和治疗腹泻的一个新方向。目前关于NHEs基因与肠管分泌性腹泻的研究尚少,本文在前人研究的基础上利用LPS建立动物急性腹泻模型,通过动物精神状态、粪便排放、肠管蠕动和组织形态学变化来判定模型的建立;利用分子生物学的方法(qRT-PCR)对动物不同肠管NHEs基因进行定量检测,并分析模型组和对照组肠管NHEs基因的差异表达。结果如下:LPS注射后1h和8h组均出现不同程度的腹泻,精神萎靡,采食量有所下降,与对照组形成明显差别;摄像观察发现:试验组小鼠肠管运动较剧烈,肠系膜静脉充血,肠壁明显水肿,随着注射时间的延长,水肿现象更为严重,肠系膜静脉血管,呈紫黑色;组织学观察结果显示,LPS注射1h后,黏膜及绒毛排列轻度紊乱,绒毛缩短,无黏膜变性、坏死,出现上皮细胞下间隙增大,肠腺轻度受损,毛细血管充血;注射后8h,小肠绒毛明显水肿,绒毛排列紊乱,绒毛黏膜糜烂脱落,肠腺受损,毛细血管发生明显充血,有炎症细胞浸润;提示LPS成功地诱导小鼠发生了腹泻。qRT-PCR对NHEs基因进行定量检测结果发现:小鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠均有NHE2、NHE3、NHE8基因的表达;NHE2基因表达水平高低:空肠>十二指肠=结肠>回肠;NHE3基因表达水平高低:结肠>十二指肠=空肠>回肠;NHE8基因在各肠管表达一致;LPS注射1h后上调十二指肠NHE2基因表达,8h下调其表达;LPS能下调回肠、结肠NHE2基因表达,上调空肠NHE2基因表达,且依赖作用时间;LPS均上调十二指肠、空肠、回肠和结肠NHE3基因表达,且依赖作用时间,8h均达到差异极显著水平;LPS注射1h后上调十二指肠NHE8基因表达,8h下调其表达; LPS上调空肠、回肠NHE8基因表达,下调结肠NHE8基因表达,且依赖作用时间。依据以上结果提示,LPS诱导腹泻的发生与肠管NHEs基因转录水平的变化密切相关,且NHEs各亚型在不同肠管发挥的作用也不同。
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