油茶是我国南方主要的木本食用油料树种,在我国国民经济及人民生活中占有重要地位,但其产量偏低。为改变油茶低产现状,鉴于单倍体育种的诸多优势,本研究应用该技术进行油茶品种的改良。由于油茶花药培养方面的研究刚刚起步,所以重心放在单倍体育种最基础性的研究上。 一、油茶花药愈伤组织的诱导 为了提高油茶花药愈伤组织诱导率,以普通油茶、小果油茶、攸县油茶、浙江红花油茶、广宁红花油茶、腾冲红花油茶、越南油茶、宛田红花油茶为实验材料,通过一系列的实验,在建立油茶单倍体育种技术体系的研究中取得了阶段性进展。 在找到了处于小孢子单核期花蕾的外部形态指标后,通过大量的实验,摸索到油茶花药愈伤组织诱导的基本方法,初步筛选出了适宜油茶花药愈伤组织诱导的技术方案。实验结果表明: (1) 在八个油茶物种中,普通油茶、小果油茶的诱导效果好于其他物种。 (2) 预处理:低温处理有利于油茶花药愈伤组织的诱导,只是不同物种的最佳处理时间不同;离心预处理同样可以提高诱导率。 (3) 激素:以2,4-D0.5mg/L、6-BA0.2mg/L为本实验得出的较佳的激素组合,其中6-BA为主导因素。在2,4-D、NAA的组合中,2,4-D起着主导作用,诱导率随着2,4-D的浓度增加而增加。 (4) 培养基:MS培养基适宜用于油茶花药培养,其中琼脂用量为0.7%、蔗糖浓度为3%～4%时,愈伤组织诱导效果较佳。 (5) 光照条件:黑暗条件下培养更有利于油茶花药愈伤组织的诱导。 二、褐化愈伤组织的组织化学分析 为了研究油茶花药培养出现的褐化问题,为找到有效减轻褐化的方法指明方向,从组织化学分析方面着手,在对褐化及无褐化愈伤组织细胞内含物质进行了细致对比后,发现油茶花药愈伤组织诱导过程中出现的花药及愈伤组织褐化多属于细胞程序性死亡或自然死亡,而非组织培养中传统所认为的酚类物质氧化引起的。这种组织细胞的死亡多是由于对外界环境条件的不适应而诱发的,所以可以通过改善培养方法及培养环境来减轻这种褐化现象。