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目的 本研究主要探讨G6PD对大肠癌HCT116和SW480细胞葡萄糖消耗、生长及迁移的影响,以及G6PD与HKⅡ在大肠癌及其癌旁上皮组织中的表达情况和两者的相关性,为探讨大肠癌发生发展的机制及临床早期诊断提供实验依据。方法 将体外培养的大肠癌HCT116和SW480细胞进行G6PD过表达和干扰处理,过表达实验采用Flag和Flag-G6PD质粒转染大肠癌细胞,分为Flag空载体转染组和Flag-G6PD转染组;干扰实验采用siRNA对大肠癌细胞进行转染,分为阴性对照组和G6PD-Homo-318、G6PD-Homo-873、G6PD-Homo-1504干扰组。Western blot法检测细胞中G6PD和HKⅡ的蛋白表达水平;流式细胞术分析细胞周期进程;葡萄糖氧化酶法检测过表达和干扰G6PD后培养液中剩余葡萄糖的含量;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫组化法检测大肠癌及癌旁组织中G6PD与HKⅡ蛋白的表达水平,并分析两者的相关性。结果 1.过表达G6PD后,Flag-G6PD转染组G6PD蛋白表达水平显著高于Flag转染组(P<0.05);siRNA干扰G6PD后,G6PD-Homo-318干扰组与阴性对照组相比无明显变化(P>0.05),G6PD-Homo-873和G6PD-Homo-1504干扰组G6PD蛋白表达水平显著低于阴性对照组,而G6PD-Homo-1504干扰下调更显著。2.过表达G6PD后,与Flag转染组相比,Flag-G6PD转染组两种细胞培养液中剩余葡萄糖浓度无明显变化(P>0.05);siRNA干扰G6PD后,G6PD-Homo-1504干扰组两种细胞培养液中剩余葡萄糖浓度显著高于阴性对照组(P<0.05)。3.过表达G6PD后,Flag转染组与Flag-G6PD转染组两种细胞S期所占比例无明显变化(P>0.05);siRNA干扰G6PD后,G6PD-Homo-1504干扰组两种细胞S期所占比例与阴性对照组相比明显减少(P<0.05)。4.过表达G6PD后,Flag转染组与Flag-G6PD转染组两种细胞间迁移能力无明显变化(P>0.05);siRNA干扰G6PD后,G6PD-Homo-1504干扰组两种细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.05)。5.过表达G6PD后,Flag-G6PD转染组HKⅡ的蛋白表达水平与Flag转染组相比显著升高(P<0.05);siRNA干扰G6PD后,G6PD-Homo-1504干扰组HKⅡ的蛋白表达水平与对照组相比显著下调(P<0.05)。6.免疫组化结果显示,大肠癌组织中G6PD与HKⅡ表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);并且G6PD与HKⅡ在大肠癌组织中表达水平呈正相关(P<0.05)。结论 G6PD加速了大肠癌细胞对葡萄糖的消耗,促进了细胞的增殖和迁移能力;干扰G6PD降低了HKⅡ的蛋白表达,过表达G6PD则促进了HKⅡ的蛋白表达;与癌旁组织相比,大肠癌组织中G6PD与HKⅡ蛋白表达水平均显著升高,且两者在大肠癌组织中的表达水平呈正相关。