论文部分内容阅读
一.研究背景解整合素-金属蛋白酶33（a disintegrin and metalloproteinase33,ADAM33）是一种基质金属蛋白酶,表达在肺的成纤维细胞和支气管平滑肌细胞,与气道上皮细胞损伤后的修复有关。ADAM33基因的单核苷酸多态性（single nucleotidepolymorphism,SNP）广泛存在,最近研究表明,ADAM33有多个单核苷酸多态性与气道高反应性（bronchial hyperresponsiveness,BHR）及支气管哮喘密切相关。尤其值得注意的是,与支气管哮喘及气道高反应性相关的多态性位点主要位于3′端编码跨膜结构域、胞浆结构域及3′端非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）,其中,包含位于ADAM33基因的第20个外显子区的T1位点。已有研究表明,T1位点碱基改变是由C代替T,而使ADAM33编码的第764个氨基酸由蛋氨酸（Methionine,Met）变成苏氨酸（Threonine,Thr）,从而增加了哮喘发病的易感性。在不同种族中,同一SNP分布频率不同,且对哮喘病的影响也不尽相同。目前,尚未见我国华南地区汉族人群ADAM33基因多态性与哮喘关联性的研究报告。二.研究目的我们的研究以中国华南地区正常人和哮喘患者为研究对象,应用现代分子生物学方法,对目前已知的可能涉及哮喘发病的ADAM33基因T1位点多态性进行检测,从而了解ADAM33基因T1位点多态性与中国华南地区汉族人群哮喘关联性的情况,从而在分子水平探索遗传因素在中国华南地区汉族人群哮喘发病及其肺功能改变中起的作用。三.材料和方法我们观察哮喘患者和正常人两组人群。哮喘病组164例,男性101例,女性63例,正常人组112例,男性69例,女性43例;两组年龄、性别均无显著性差异。上述两组研究对象均为中国华南地区汉族人,所有研究对象均知情同意。用试剂盒提取静脉血白细胞基因组DNA。ADAM33的基因型用聚合酶链反应及限制性片断长度多态性法（PCR-RFLP）检测。比较了两组之间的三种基因型的分布及等位基因频率;还将我国华南地区汉族人群ADAM33基因T1位点等位基因频率与英国、美国、德国、韩国的不同种族人群的ADAM33基因T1位点等位基因频率进行比较。肺通气功能测定使用6200 AutoboxDL型体积描记仪,按规定校准后测定。记录用力肺活量（forced vital capacity,FVC）实测值/预测值%、第一秒用力呼气量（forced expiratory volume in one second,FEV1）实测值/预测值%等肺功能检测数据,比较哮喘组中三种基因型之间的肺功能差异是否有显著性。四.结果1.哮喘组和正常组年龄之间的比较采用t检验,t=0.468,P＞0.05。2.哮喘组和正常组性别之间的比较采用x2检验,P=0.997（P＞0.05）3.ADAM33基因T1位点TT、TC、CC基因型在哮喘组的分布频数分别为129、30、5;等位基因T和C分布频率分别为0.878、0.122;对不同基因型实际频数和期望频数做x2检验,差异无统计学意义（x2=3.4878,P＞0.05）。ADAM33基因T1位点TT、TC、CC基因型在对照组的分布频数分别为102、7、3;等位基因T和C频率分别为0.942、0.058;对不同基因型实际频数和期望频数做x2检验,差异有统计学意义（x2=20.5514,P＜0.05）。4.ADAM33基因第20外显子区T1位点SNP存在于中国华南地区汉族人群中,其分布为:TT基因型例91.1%（102例）、TC基因型6.3%（7例）、CC基因型2.7%（3例）。5.英国、美国、德国、韩国及中国华南地区不同种族人群ADAM33基因T1位点的等位基因分布频率比较,差异无显著性（x2=6.769,P＞0.05）6.哮喘组和正常人组ADAM33基因T1位点三种基因型分布差异有显著性意义（x2=8.456,P＜0.05）,哮喘组CC基因型,C等位基因明显高于正常人组（x2=6.265,P＜0.05）7.ADAM33基因T1位点基因多态性与哮喘的关系,相对TT基因型而言,TC杂合型与TC+CC基因型,均能显著增加哮喘发生的危险性（P＜0.05）。8.T1位点SNP三种基因型间用力肺活量（FVC）实测值/预测值%、第一秒用力呼气量（FEV1）实测值/预测值%水平有差异,TT基因型与CC基因型比较差异有显著性意义（P＜0.05）;而TC基因型与TT基因型、CC基因型比较无显著性意义（P＞0.05）。五.结论1.ADAM33基因T1位点TT、TC、CC基因型在哮喘组中的分布,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;ADAM33基因T1位点TT、TC、CC基因型在正常组中的分布,基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡定律。2.ADAM33基因第20外显子区T1位点SNP存在于中国华南地区汉族人群中。3.ADAM33基因T1位点多态性广泛存在于不同地域,不同种群中,且分布频率差异无显著性。4.T1位点SNP与中国华南地区汉族人群哮喘的发生有明显的相关性,T等位基因可能是哮喘的保护基因,C等位基因可能是哮喘发病的易患基因。5.T1位点SNP影响哮喘发生的可能机制:可能是通过降低肺功能,从而导致哮喘的发生发展。