目的：分离尿路致病性大肠杆菌(Uropathogenic Escherichia coli，UPEC)临床流行株，构建UPEC溶血素A(hemolysin A，hlya)基因重组质粒并进行序列分析。了解其基因变异情况。 方法：自临床尿路感染标本中分离溶血性大肠杆菌10株。按GenBank中的hlya基因保守序列设计合成引物。以获得的UPEC基因组DNA为模板，用PCR方法扩增其hlya基因片段。将目的基因克隆至pUC18载体，转化大肠杆菌DH5a，筛选并鉴定阳性克隆。对获得的阳性克隆测序并进行同源性分析。 结果：扩增的hlya目的基因大小744bp。重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子。重组菌株在血培养基上可产生β溶血环。测序结果显示，10个分离株DNA序列同源性高于99.7％。其与GenBank中的hlya基因序列的同源性为99％以上。10个序列中共发生13处碱基的替代，但均属于同义突变，没有碱基的插入与缺失。 结论：UPEC hlya基因高度保守。本研究在国内首次成功地克隆了UPEC基因。为进一步研究hlya的结构、阐明UPEC的致病机理、探讨hlya作为特异性诊断靶点及保护性疫苗的研究奠定了基础。