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目的：血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)完整性的破坏已成为实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)和人类多发性硬化(multiple sclerosis, MS)发病机制中的重要环节。本实验应用雌二醇(estradiol, E2)治疗Wistar大鼠去卵巢后EAE,观察临床疗效和潜在的免疫学机制,目的在于探讨EAE的发病机制和应用E2治疗EAE的作用机制,为今后临床应用雌激素辅助治疗MS等CNS自身免疫性疾病提供实验依据。方法：制备去卵巢EAE动物模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂组。E2治疗组从免疫后(post-inoculation, p.i.)0～8天每日肌注E2(250μg/kg)一次。按照国际通用的五分法评估临床症状,观察体重变化、发病率等临床指标。观察各组在不同时间点的血清E2浓度及血清和脑脊液中白蛋白含量比值(CSF to serum albumin quotient, QA),通过QA评定BBB的损害。在p.i.8、11、14、17天处死动物,采用Western blot和免疫荧光法检测各组基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达；利用免疫组化技术检测CNS中不同部位转化生长因子-β(Transforming growth factor-β，TGF-β)的表达。采用SPSS13.0软件对所得数据进行分析处理。结果：1.大鼠去卵巢后血清E2水平迅速下降,经E2(250μg/kg.d)连续补充9天后其水平迅速升高,当停止补充E2后其又以较快的速度代谢至去卵巢后低水平状态。在p.i.8、11、14天,E2治疗组血清E2水平较EAE组显著升高(F=1532.63,P<0.05)。在p.i.17天,E2治疗组血清E2代谢至去卵巢后低水平状态。2.EAE组在p.i.11天开始出现明显的临床症状,起病突然,发病轻重不一,表现有尾麻痹、后肢无力、体重下降等。在p.i.14天左右发展为发病高峰期,进一步表现为后肢瘫痪、易激惹、体重迅速下降,个别处于濒死状态。在p.i.17天左右病情开始缓解,临床症状减轻,体重开始回升,相应的临床症状评分下降。E2治疗组的发病率、平均体重减轻、平均症状评分、平均病灶数、平均发病日期,这5项临床指标与EAE组比较均明显减少或延迟,均有统计学差异(P<0.05)。3.EAE组在p.i.8天时QA值已明显升高(0.36±0.04),BBB受损较重,之后随着免疫时间的延长,QA值逐渐下降,BBB的功能逐渐恢复。E2治疗组免疫后初期QA值仅有小幅度的增加,在p.i.14天时达到最大值(0.18±0.03),但增幅较小,出现峰值的时间较EAE组延迟,BBB受损较轻。经两因素多水平方差分析统计表明：在p.i.8～17天,EAE组与E2治疗组比较,QA值总的变化趋势有统计学差异(F=21.26,P<0.05)。4.EAE、E2治疗和佐剂组的脑和脊髓中均有MMP-9表达。Western blot显示一条谱带位于92KD处,代表MMP-9酶原形式,另一条位于83KD处,代表MMP-9活性形式。Western blot及荧光免疫组化检测表明：EAE组MMP-9表达较佐剂组高(P<0.05),E2治疗组与EAE组相比显著减低(P<0.05)。EAE组MMP-9的表达与症状评分呈显著正相关(r=0.87,P<0.05)。5.TGF-β主要由进入CNS的淋巴细胞产生,免疫组化染色阳性表达表现为由血管渗出的淋巴细胞周围有不同程度着色。结果显示：EAE组、E2治疗组TGF-p的表达程度与病情轻重相反。经图像分析显示,E2治疗组TGF-β平均积分光密度在炎症活动高峰期p.i.14天时达到最大值3259.16±541.62,与EAE组(1086.59±214.49)比较有统计学差异(F=17.36,P<0.05),表明E2治疗组TGF-β表达高于EAE组。经两因素多水平方差分析统计表明：在p.i.8～17天,EAE组与E2治疗组TGF-β平均积分光密度值比较有统计学差异(F=23.35,P<0.05),表明E2治疗组TGF-p表达明显高于EAE组。结论：1.去卵巢后EAE血清E2水平降低,经补充E2后明显升高,当停止补充E2后又以较快的速度代谢至去卵巢后低水平状态。2.继早期BBB损伤高峰之后,EAE临床症状开始出现并逐渐加重。3.EAE发病高峰期脊髓MMP-9表达明显上调。下调MMP-9的表达进而恢复BBB的正常功能是E2抑制EAE的可能机制之一4.EAE中TGF-β的表达程度与病情轻重相反,E2有效抑制EAE与其能够上调TGF-β的表达,促使Th细胞发生转分化有关。