散发性结直肠癌高频杂合缺失精细定位及SMAD4基因突变的初步研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gamebugs2009
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目的:研究散发性结直肠癌3、5、7、20、22号染色体杂合性缺失并对高频杂合性缺失区域行精细定位,寻找新的结直肠癌抑癌基因。 方法:3、5、7、20、22号染色体分别采用13、16、15、10、6个微卫星DNA标记,在3q24—25、5p15、5q14、7q21—22、20q11—13、22q12区另取6、6、7、5、10、7个微卫星标记对83例结直肠癌肿瘤标本和相应正常组织进行PCR反应。PCR产物在ABI Prism 377自动荧光测序仪进行电泳3小时,以GeneScan3.1和Genotyper 2.1软件进行基因分型。 结果:我们在五号染色体上发现两个高频杂合缺失区即5p15和5q14-q22区,对5p15区再用6对微卫星标记引物行精细定位,界定了一个包含有D5S416位点的精细的高频杂合缺失区域;应用7对微卫星标记引物对5q14区行精细定位,界定了三个共同区域:包含D5S641和D5S2094在内的大约2cM的区域、包含D5S428位点的约2cM的区域及含有D5S617、D5S2495、D5S2103位点的约4cM的区域;在3号染色体发现两个明显的高频杂合缺失区域即3p14区和3q24-25区,对3q24—25区应用6对微卫星标记引物界定了一个大约2cM大小的跨越D3S1279位点的杂合缺失区;在7号染色体我们发现一个明显的高频杂合缺失区域即染色体长臂上的7q21—22区,应用5对微卫星标记引物界定一个2-3cM大小的跨越D7S657、D7S646位点的杂合缺失区;在20号染色体发现一个明显的高频杂合缺失区域即20q11-13区,应用10微卫星标记引物界定两个个高频杂合缺失区域即2-3cM大小包含有D20S878位点杂合性缺失区和1—2cM大小含D20S107位点的高频杂合缺失区;在22号染色体发现一明显的高频杂合缺失区域即22q12区,应用7对微卫星标记引物在该区确定了三个高频杂合缺失区域即:包含有D22S1154、D22S1144位点约1cM的杂合性缺失区、含D22S1150、D22S1176位点约1cM的高频杂合缺失区以及含D22S280、D22S1162位点约1cM的高频杂合性缺失区。 结论:通过精细杂合缺失作图的研究,我们在3、5、7、20、22号染色体上发现了数个精细的杂合缺失区域,这些区域很可能存在多个与结直肠癌相关的新的抑癌基因。
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