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目的:探讨靶向双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)转染NK-92细胞后(GD2-CAR-NK-92细胞),对GD2~+神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)细胞的靶向治疗作用。方法:利用分子克隆技术从含靶标GD2的质粒上获得GD2-CAR的编码序列,通过电泳和测序鉴定后,将GD2-CAR片段克隆到慢病毒载体上,然后用慢病毒对NK-92细胞进行转染,建立GD2-CAR-NK-92细胞。利用流式细胞术和蛋白免疫印迹方法检测目的蛋白在GD2-CAR-NK-92细胞上的表达。利用非放射性细胞毒性方法检测GD2-CAR-NK-92细胞对GD2~+的NB细胞的靶向杀伤作用。结果:电泳和测序结果显示GD2-CAR的序列正确,转染NK-92细胞后,GD2-CAR在GD2-CAR-NK-92细胞上的阳性表达率为98.4%。GD2-CAR-NK-92细胞对GD2~+的NB细胞株BE(2)-C的杀伤率为(37.53±0.34)%,显著高于未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(6.03%±1.71%和6.07%±2.06%),差异有统计学意义(P<0.001)。GD2-CAR-NK-92细胞对GD2~-的NB细胞株SK-N-SH的杀伤率为(30.90±0.25)%,与未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(33.73%±1.50%和34.77%±2.54%)相似,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建了表达靶向GD2-CAR基因的慢病毒载体,慢病毒成功转染了NK-92细胞,并且该嵌合抗原受体可在NK-92细胞上正确表达。GD2-CAR-NK-92细胞对GD2~+的NB细胞有显著的靶向杀伤作用,为嵌合抗原受体技术治疗NB的临床转化应用提供了体外实验依据。