【摘 要】
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血清4型禽腺病毒可以感染多种禽类,引起家禽较高感染率和死亡率,其中,鸡是最易感动物,可以诱发鸡的心包积液综合征。目前,对于FAd V-4毒株在传代过程中毒力变化、病毒的感染方式、不同感染方式的死亡率以及编码主要结构蛋白基因突变的研究较少,为此本文对所分离FAd V-4毒株主要做了以下三个方面的研究。一、制备第2～15代次FAd V-4毒株,测定不同代次毒株TCID50。将感染FAd V-4的病变鸡
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血清4型禽腺病毒可以感染多种禽类,引起家禽较高感染率和死亡率,其中,鸡是最易感动物,可以诱发鸡的心包积液综合征。目前,对于FAd V-4毒株在传代过程中毒力变化、病毒的感染方式、不同感染方式的死亡率以及编码主要结构蛋白基因突变的研究较少,为此本文对所分离FAd V-4毒株主要做了以下三个方面的研究。一、制备第2～15代次FAd V-4毒株,测定不同代次毒株TCID50。将感染FAd V-4的病变鸡肝脏研磨后,经尿囊腔接种SPF鸡胚,收集尿囊液,观察死亡鸡胚病变。选取第2、4、7、8、12和15代毒株感染LMH细胞,测定TCID50。结果发现毒株所接种鸡胚在6～7 d内全部死亡;死亡鸡胚出现胚体发育不良、皮肤出血及肝脏出血肿大等病理变化;6个代次毒株TCID50测定结果分别为106.56/0.1m L、106.37/0.1m L、106.45/0.1m L、106.45/0.1m L、106.53/0.1m L和106.50/0.1m L,各代次间毒力差异不显著（P＞0.05）,这说明,不同代次毒株间毒力无明显差异。二、探究不同代次毒株不同感染方式对雏鸡的致病性及确定病毒对不同日龄雏鸡的致病性。选取第2、4、7、8和15代毒株以0.05 m L/只的剂量经颈背部皮下、黏膜（点眼）和口腔灌服三种途径接种7日龄SPF雏鸡,同时并设立空白对照组。观察不同接种方式组雏鸡的死亡时间、死亡率以及病理变化。结果发现,皮下接种组雏鸡在3～6 d内全部死亡。黏膜组在5～7 d内部分死亡,5个代次的死亡率依次为80%、50%、40%、30%和30%,剖检病死鸡均出现明显心包积液。口腔灌服组无雏鸡发病,死亡率为0%,空白组也未见雏鸡发病。将第2代毒株经皮下途径接种10～40日龄雏鸡,发现10～25日龄雏鸡死亡较早,25～40日龄雏鸡死亡时间相对延后,但不同日龄组雏鸡死亡率均为100%。这说明,不同代次毒株对雏鸡的致病性强,病毒可以通过皮下和黏膜感染雏鸡但不通过口服感染;雏鸡死亡时间随着日龄的增加而相对延长。三、比对分析不同代次毒株编码主要结构蛋白的基因序列。提取不同代次毒株DNA,进行PCR扩增,测序后对序列进行比对分析,同时研磨病死鸡肝脏提取DNA,与亲本毒株基因序列比对。结果发现不同代次的毒株主要结构蛋白Hexon、Fiber1和Fiber2基因未突变,亲本毒株结构蛋白基因在雏鸡体内也未出现突变,由此可知FAd V-4毒株编码主要结构蛋白Hexon、Fiber1和Fiber2基因在传代过程中及在机体内均未发生突变。总之,通过研究毒株在传代过程中毒力变化、不同感染方式的死亡率以及编码主要结构蛋白基因突变分析,结果显示毒力未见明显差异;毒株可通过皮下和黏膜感染,不通过口腔感染;编码主要结构蛋白的基因未在传代过程中及机体内发生突变。
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