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目的:实验研究以血管性痴呆与神经血管单元内各细胞之间的关系为切入点,选用血管性痴呆动物模型,从动物行为学、细胞形态学层面观察艾灸头部组穴对VD模型大鼠学习记忆力及神经血管单元内的神经元细胞、小胶质细胞、星形胶质细胞的形态及数量表达的影响,从而探索艾灸治疗血管性痴呆的疗效和作用机制。方法:将经过水迷宫实验筛选出合格的健康清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠46只,从中随机选出10只作为假手术组,其余大鼠采用改良的双侧颈总动脉结扎(2-VO)法制备大鼠VD模型,从术后验证造模成功27只大鼠中随机选取18只分为3组,分别为模型组、艾灸组、吡拉西坦组,每组6只。造模结束后一周分别开始艾灸及灌胃治疗,艾灸组选取“大椎”、“百会”、“神庭”穴,每天每穴艾灸1次,每次20min,7天为一疗程,连续治疗三疗程;吡拉西坦组予以吡拉西坦溶液(0.01g/ml)灌胃治疗,每日早晚定时灌胃1次,疗程同艾灸组;模型组与假手术组的治疗时间与艾灸组平行,只抓取装入自制大鼠艾灸固定器中,不作任何相关处理。三疗程结束后四组大鼠分别采取Morris水迷宫实验及神经行为学评分,记录评价艾灸对大鼠学习记忆能力的影响。5天水迷宫实验结束后24h将四组大鼠麻醉后行心脏灌注多聚甲醛内固定后进行脑组织取材,包埋切片后采用HE染色观察大鼠海马组织CA1区病理变化,以及免疫组化技术标记各组大鼠海马组织CA1区Neu N、Iba-1、GFAP观察阳性细胞形态、计数阳性细胞数与平均光密度值。以上所有实验数据采用SPSS23.0进行统计分析。结果:(1)水迷宫实验结果可见,模型组大鼠找到平台的平均逃避潜伏时间比假手术组找到平台的潜伏期长(p<0.01),另空间探索实验中模型组首次穿越平台时间较假手术组明显延长(p<0.01)及穿越平台次数明显减少(p<0.01),提示模型组大鼠出现了空间学习记忆障碍;与模型组比较,吡拉西坦组与艾灸组平均逃避潜伏期明显缩短(p<0.01)、首次穿越平台时间明显减少(p<0.01)、穿越平台次数明显增多(p<0.01、p<0.05),说明吡拉西坦组与艾灸组均可改善VD大鼠的空间学习记忆能力。Longa评分统计结果示模型组神经行为学评分显著高于假手术组(P<0.01),说明模型组大鼠的神经功能有所缺损;吡拉西坦组与艾灸组Longa评分明显低于模型组(p<0.05),说明吡拉西坦组与艾灸组干预治疗可有效改善VD大鼠神经功能恢复。(2)大鼠海马CA1区病理形态:HE染色后,400倍显微镜下观察大鼠海马组织CA1区,假手术组锥体细胞形态规则且排列紧实,细胞数量多约有4-5层细胞,细胞膜核仁清晰可见;模型组锥体细胞数量明显减少,细胞层数约1-2层,细胞轮廓模糊不清,部分细胞核消失,核固缩、大量细胞坏死破裂;吡拉西坦组与艾灸组CA1的锥体细胞较模型组细胞数量明显增多,细胞层数约3-4层且排列整齐,细胞轮廓清晰,少量胞核固缩。(3)VD大鼠海马CA1区神经元、小胶质细胞及星形胶质细胞形态:(1)神经元细胞,假手术组阳性细胞染色较深且数量较多,排列整齐,形态完整;模型组阳性表达细胞较少,细胞排列紊乱,细胞间隙增大;吡拉西坦组与艾灸组,对比模型组其细胞排列较整齐,间隙变小,细胞形态相对完整,数量增多。(2)小胶质细胞,假手术组阳性细胞呈分枝状,胞体痩长且数量少,突起及分枝较少;模型组阳性细胞颜色变深,数量明显增加,胞体变大变圆,突起变粗;与模型组相比吡拉西坦组与艾灸组星形胶质胞体肥大减轻,数量明显较少,染色变浅。(3)星形胶质细胞,假手术组阳性细胞数量较少且胞体较小,突起及其分枝细长而少,染色较淡,模型组阳性细胞数量增多,胞体变大,突起增大变粗,且数量增多,染色变深。与模型组相比吡拉西坦组与艾灸组星形胶质细胞数减少,胞体变小,突起及分枝变细,染色变淡。(4)阳性细胞数统计与平均光密度值结果:Iba-1标记的小胶质细胞:与假手术组相比,模型组阳性细胞计数与平均光密度值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,吡拉西坦组与艾灸阳性细胞计数与平均光密度值明显减少(P<0.01);艾灸组的阳性细胞计数与平均光密度值低于吡拉西坦组,但差异无统计学意义(P=0.46,P=0.11>0.05)。GFAP标记星形胶质细胞:与假手术组相比,模型组阳性细胞计数与平均光密度值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,吡拉西坦组与艾灸阳性细胞计数与平均光密度值明显减少(P<0.01);艾灸组与吡拉西坦组阳性细胞计数及平均光密度值比较无统计学意义(P=0.85,P=0.81>0.05)。结论:(1)艾灸头部组穴可减轻VD模型大鼠海马CA1区椎体细胞的病理改变。(2)艾灸头部组穴可下调VD模型大鼠海马组织CA1区Iba-1与GFAP表达量,抑制小胶质细胞和星形胶质细胞过度活化增生,减少神经元损伤。(3)艾灸头部组穴可提高VD模型大鼠空间记忆能力,降低神经行为学评分,促进神经功能损伤恢复。