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目的:补肾化痰开窍法是中医学的重要治法之一,在老年性痴呆的防治过程中起着重要作用。本文系统回顾和总结了古代医家对老年性痴呆的认识,认为此病的基本病机是痰蒙清窍,肾元亏虚,属本虚标实之证。从肾虚痰蒙清窍理论探讨老年性痴呆的发病机理和治疗法则,本课题以APP/PS1双转基因小鼠作为老年性痴呆动物模型,观察补肾化痰开窍法对小鼠学习记忆水平、脑组织病理形态和泛素-蛋白酶体通路相的影响,探讨补肾化痰开窍法对该模型的干预作用和作用机理,旨在为补肾化痰开窍法防治老年病的研究提供理论基础和实验依据。方法:1.理论探讨:整理与中医补肾化痰开窍法有关的古今文献,分析补肾化痰开窍法的概念、内涵,探讨补肾化痰开窍法的理论基础,及其防治老年性痴呆的理论依据。2.以APP/PS1双转基因小鼠为老年性痴呆动物模型,泛素-蛋白酶体途径为研究靶点,研究补肾化痰开窍法对老年性痴呆的作用及其机制。观察跳台测试、Morris水迷宫测试对小鼠为行为学影响,检测小鼠的学习记忆能力;HE染色、免疫组织化学染色法观测小鼠海马组织泛素-蛋白酶体途径病理学变化,用Western Blot法检测小鼠海马组织泛素-蛋白酶体途径主要蛋白的含量;以Real Time-PCR检测小鼠海马组织泛素m RNA的表达。结果:1.Morris水迷宫测试结果:空白组比较,模型组小鼠发现平台时间明显延长(P<0.01),游泳总路程明显增加(P<0.01);与模型组比较,各组小鼠发现平台时间均缩短(P<0.05),游泳总路程均减少(P<0.05);各给药组与多奈哌齐组比较各组小鼠发现平台时间未见明显差异(P>0.05),游泳总路程未见明显差异(P>0.05)。益智温胆组与菖蒲益智丸组比较,两组小鼠发现平台时间未见明显差异(P>0.05),游泳总路程未见明显差异(P>0.05)。2.跳台测试实验结果给药90天后,与空白组比较,模型组小鼠的在跳台中错误次数明显增加(P<0.01),潜伏期明显缩短(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和其它各组小鼠的出错次数明显减少(P<0.01),多奈哌齐组、益智温胆组和菖蒲益智丸组小鼠的潜伏期明显延长(P<0.01)。与多奈哌齐组比较,益智温胆组和菖蒲益智丸组小鼠的出错次数和潜伏期无明显差别(P>0.05);补肾组化痰组出错次数和潜伏期有所差别(P<0.05),化痰组潜伏期有所差别(P<0.05)。3.HE染色模型组主要表现为较明显的脑神经元变性、可见到神经纤维缠结和淀粉样蛋白沉积斑块。多奈哌齐组和补肾组对模型转基因小鼠海马病理形态影响不明显,多奈哌齐组仅仅可以观察到神经元数量变化,以及细胞结构排列较为整齐,补肾组神经元形态排列较为整齐,结构较多奈哌齐组完整。益智温胆组、菖蒲益智丸组、化痰组对神经元的保护,空泡变性以及细胞核增大也有一定好转,神经细胞排列以及细胞形态明显较好,神经纤维缠结不明显。4.免疫组化泛素阳性免疫产物定位于海马区神经元细胞浆内。免疫组化结果显示模型组、多奈哌齐组切片内海马CA1区可见大量泛素,补肾组海马CA1区也可见到有部分泛素的聚集;益智温胆组与菖蒲益智丸组相差不多,二者最少。空白组小鼠海马CA1区灰度值明显较低(P<0.01);而多奈哌齐组与其相差无几无明显差异(P>0.05);益智温胆组、补肾组、化痰组与菖蒲益智丸组小鼠海马CA1区灰度值与其有明显差异(P<0.01)。5.小鼠海马组织Western Blot实验结果APP/PS1双转基因小鼠海马组织泛素抗体蛋白质印迹检测结果表示:与空白组比较,模型组小鼠海马组织泛素相对表达量有显著性差别(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组海马组织泛素相对表达量未见显著性差异(P>0.05);模型组较其它各组均显示表达量增加。6.小鼠海马组织Real Time-PCR实验结果与空白组比较,模型组泛素m RNA表达明显上调,益智温胆组、补肾组、化痰组、菖蒲益智丸组泛素m RNA均有不同程度的上调。与模型组比较,多奈哌齐组、益智温胆组、补肾组、化痰组、菖蒲益智丸组泛素m RNA均有不同程度的下调。结论:1.肾虚痰蒙清窍是老年性痴呆的基本病机,补肾化痰开窍法能够有效的防治老年性痴呆。2.补肾化痰开窍法对APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力具有改善作用。3.补肾化痰开窍法能有效的改善动物海马泛素化通路功能,