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本实验从大连瑞泽农药公司的废水中筛选到了一株氯苯高效降解菌,并对其进行了菌种鉴定、生长曲线测定、抗性及最佳降解条件测定,同时对菌株质粒的提取、质粒的消除及质粒消除后菌株的降解特性进行了探究。主要实验结果如下:(一)氯苯降解菌的降解特性研究1、菌种的分离和鉴定实验筛选到一株氯苯高效降解菌,该菌株能够以氯苯为唯一碳源进行生长。运用扫描电镜、生理生化检测及16SrDNA序列分析,鉴定该菌株为肠杆菌属(Enterobacter.)。其对链霉素不敏感,具有抗性,而对实验中所选用的其他抗生素都比较敏感,不具有抗性。2、氯苯降解菌CB-2最佳降解条件氯苯降解菌CB-2降解氯苯的最佳条件为:底物浓度120 mg/L,pH7.0,温度30℃,摇床转速120rpm,接种量为5%。在上述最适培养条件下,该菌株对氯苯降解率可达75%。(二)氯苯降解菌CB-2的质粒特性的研究1、质粒提取对于野生菌株需要选择合适的方法进行质粒提取,实验采用了碱裂解法、煮沸法和SDS法三种方法进行质粒提取,结果显示,SDS法提取效果最好,所得到的质粒带与检测到的质粒带结果一致,质粒的大小约为23kb。SDS法是一种相对比较温和的质粒提取方法,适合于大质粒的提取。煮沸法的操作虽然快捷,但反应剧烈,对大质粒的破坏相当严重,所以实验中没有提取到质粒;常规碱裂解法对质粒也有不同程度的损坏,提取到的质粒浓度不高,效果也不理想。2、质粒消除为了考察质粒的功能,本文采用了吖啶橙、SDS和苯甲酸钠三种消除剂进行质粒消除。结果表明SDS可以消除质粒,质粒消除后的菌株在氯苯无机盐培养基上难以生长。而苯甲酸钠和吖啶橙质粒消除效果不好。3、质粒消除后菌株的降解特性经SDS质粒消除后的氯苯降解菌CB-2对氯苯的耐受力和降解率明显下降,这表明该质粒与氯苯的降解代谢过程有关,其降解基因在质粒上,随着质粒的消除,其利用氯苯的性能也丢失。通过对质粒消除后菌株对抗生素抗性的检测,发现菌株对抗生素的抗性没有变化,该质粒与菌株抗生素的抗性没有关系。4、质粒转化为进一步确认该质粒携带有降解氯苯的基因,本实验将质粒转化到E.coli中,转化子能够在以氯苯为唯一碳源的无机盐培养基上生长,且能够降解氯苯,证明该质粒上携带有氯苯降解性基因。