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目的 在前期工作的基础上, 探讨高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)治疗 H22 移植性肝癌后,荷瘤鼠外周血淋巴细胞的免疫功能变化及特异性抗肿瘤效应,为阐明 HIFU 治疗后机体抗肿瘤免疫功能增强的机制提供依据。 材料和方法 1、HIFU 治疗后淋巴细胞的体外特异性抗肿瘤效应 24 只正常 C57BL/6J 系小鼠,随机分为三组:HIFU 治疗组(n=8)、HIFU 假照组(n=8)和对照组(n=8)。前两组小鼠背部接种 H22 肝癌细胞株,成瘤后(接种 7 天时)分别接受 HIFU 治疗或 HIFU 假照,第三组为正常小鼠,不接种肿瘤也不接受 HIFU 照射。三组小鼠在 HIFU 治疗后第 14 天采取外周血,应用“淋巴细胞液分层法”和“贴壁法”提取外周血淋巴细胞。MTT 法分别检测三组小鼠外周血淋巴细胞对 H22 肿瘤的特异性杀伤效应。 2、HIFU 治疗后淋巴细胞的免疫保护作用 45 只正常 C57BL/6J 系小鼠,随机分为三组: HIFU 治疗组(n=15)、HIFU 假照组(n=15)和对照组(n=15)。三组小鼠分别接受尾静脉注射HIFU 治疗, HIFU 假照的荷瘤鼠外周血淋巴细胞液 0.05ml(2×107/重庆医科大学硕士研究生学位论文3ml), 或正常小鼠血清 0.05ml,每天一次,连续注射 2 天。于注射第 3天时,三组小鼠背部皮内分别接种 H22 肝癌细胞株悬液 0.05ml(6×107个/ml)。观察每组小鼠 H22 肿瘤发生率、肿瘤消退率、肿瘤生长曲线、转移发生率、生存率及生存曲线。3、HIFU 治疗后淋巴细胞的免疫治疗作用75 只正常 C57BL/6J 小鼠,随机分为三组: HIFU 治疗组(n=25)、HIFU 假照组(n=25)和对照组(n=25)。三组小鼠背部皮内接种 H22 肝癌细胞株悬液 0.05ml(6×107个/ml)。于接种后第 3 天,三组小鼠分别接受尾静脉注射 HIFU 治疗,HIFU 假照的荷瘤鼠外周血淋巴细胞液0.05ml(2×107/ml), 或正常小鼠血清 0.05ml,每天一次,连续注射2 天。观察每组小鼠 H22 肿瘤发生率、肿瘤消退率、肿瘤生长曲线、转移发生率、生存率及生存曲线。结果1、HIFU 治疗后外周血淋巴细胞的体外特异性抗肿瘤效应HIFU 组、假照组和对照组小鼠外周血淋巴细胞对 H22 肿瘤细胞的杀伤率(%) 分别为 41.02±0.63、3.74±2.50、1.24±1.73。与假照组或对照组比较,HIFU 组外周血淋巴细胞对 H22 肿瘤细胞的细胞毒活性明显增加,差异有显著的统计学意义(P= 0.0001);但假照组与对照组比较,淋巴细胞对 H22 细胞的杀伤率变化不明显,差异无统计学意义(P=0.328) 。2、HIFU 治疗后外周血淋巴细胞的免疫保护作用HIFU 组、假照组和对照组小鼠接种 H22 后 10 天的肿瘤发生率分重庆医科大学硕士研究生学位论文4别为 93.3%、100%和 100%;60 天肿瘤消退率分别为 100%、33.3%和13.3%;60 天肿瘤转移率分别是 0%、66.7%和 53.3%;60 天生存率分别是 100%、33.3%和 20%。HIFU 组除成瘤率外,上述各项指标均明显优于假照组或对照组,差异有显著的统计学意义(P < 0.05);但假照组与对照组比较,上述各项指标变化不明显,差异无统计学意义(P >0.05)。3、HIFU 治疗后外周血淋巴细胞的免疫治疗作用小鼠背部皮内接种 H22 肝癌细胞后第 3 天,局部有一个直径约4mm-6mm 大小的硬结,病理学检查证实新生的肿瘤。此时,HIFU 组、假照组和对照组小鼠接种第 3 天肿瘤体积(mm3)分别为 58.15±13.23、56.61±21.35 和 54.79±31.74,差异无统计学意义(P > 0.05);各组接种第 10 天的肿瘤发生率均为 100%。HIFU 组、假照组和对照组 60 天肿瘤消退率分别为 72%、28%和 16%;60 天肿瘤转移率分别是 8%、48%和 68%;60 天生存率分别是 88%、36%和 16%。HIFU 组除 10 天成瘤率外,上述各项指标均明显优于假照组或对照组,差异有显著的统计学意义(P < 0.05);但假照组与对照组比较,上述各项指标变化不明显,差异无统计学意义(P > 0.05)。结论1、HIFU 治疗 H22 移植性肝癌后,荷瘤鼠淋巴细胞被激活,对同种肿瘤细胞具有较强的特异性杀伤活性。2、HIFU 治疗 H22 移植性肝癌后,荷瘤鼠淋巴细胞有明显的免疫保护作用,能有效地保护正常小鼠免受同种肿瘤细胞的攻击。