【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨支持细胞自噬对镉诱导雄鼠生殖细胞凋亡的影响。方法:本研究通过野生型动物实验模型和转基因动物实验模型来探讨支持细胞自噬在镉诱导雄鼠生殖细胞凋亡中的作用。动物实验由4部分组成。实验1:8周野生型C57BL/6雄鼠给予腹腔注射镉（Cd,2 mg/kg）。于0、2、8和24 h取睾丸与血清,检测血清镉浓度、细胞自噬及细胞凋亡等相关指标。实验2:8周野生型C57BL/6雄鼠提前1 h腹腔
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目的:本研究旨在探讨支持细胞自噬对镉诱导雄鼠生殖细胞凋亡的影响。方法:本研究通过野生型动物实验模型和转基因动物实验模型来探讨支持细胞自噬在镉诱导雄鼠生殖细胞凋亡中的作用。动物实验由4部分组成。实验1:8周野生型C57BL/6雄鼠给予腹腔注射镉（Cd,2 mg/kg）。于0、2、8和24 h取睾丸与血清,检测血清镉浓度、细胞自噬及细胞凋亡等相关指标。实验2:8周野生型C57BL/6雄鼠提前1 h腹腔注射3-甲基腺嘌呤（自噬抑制剂,3-MA,20mg/kg）,再注射Cd（2 mg/kg）,于0、8和24 h取睾丸,检测细胞自噬及细胞凋亡等相关指标。实验3;8周野生型C57BL/6雄鼠提前1 h腹腔注射雷帕霉素（自噬诱导剂,Rap,1 mg/kg）,再注射Cd（2 mg/kg）,于0、8和24 h取睾丸,检测细胞自噬及细胞凋亡等相关指标。实验4:8周转基因型C57BL/6雄鼠(Amh-Cre+/Atg5flox/flox)腹腔注射Cd（2 mg/kg）,于0、2、8和24 h取睾丸,检测睾丸形态学、细胞自噬及细胞凋亡等相关指标。结果:TUNEL染色表明镉显著升高小鼠睾丸TUNEL阳性生殖细胞占比;同时,蛋白免疫印迹结果表明,镉显著升高睾丸C-casp 3及C-PARP蛋白水平;这提示,镉暴露诱发雄鼠生殖细胞凋亡。此外,蛋白免疫印迹显示镉明显升高睾丸ATG5、ATG7、LC3B-II/LC3B-I和p62的蛋白水平,双重免疫荧光染色显示镉显著升高支持细胞LC3阳性斑点数目;这提示,镉激活小鼠睾丸细胞自噬,尤其睾丸支持细胞自噬。进一步研究表明,相较于镉组,自噬抑制剂3-MA前处理显著降低睾丸LC3B-II/LC3B-I蛋白水平并升高p62蛋白水平;重要的是,3-MA前处理明显增加睾丸C-casp 3蛋白水平及TUNEL阳性生殖细胞占比;这提示,抑制自噬加重镉暴露诱发雄鼠生殖细胞凋亡。相反,相较于镉组,自噬诱导剂Rap前处理显著增加睾丸LC3B-II/LC3B-I的蛋白水平并降低p62蛋白水平;重要的是,Rap前处理显著减少睾丸C-casp 3蛋白水平及TUNEL阳性生殖细胞占比;这提示,激活自噬抑制镉暴露诱发雄鼠生殖细胞凋亡。最重要的是,相较于野生型+镉组,支持细胞自噬缺失加剧镉升高的睾丸C-casp 3蛋白水平及TUNEL阳性生殖细胞占比,明显减少镉升高的睾丸ATG5及LC3B-II/LC3B-I的蛋白水平并增加镉升高的睾丸p62的蛋白水平;同时,双重免疫荧光染色显示支持细胞自噬缺失明显减少镉升高的支持细胞LC3阳性斑点数目。综上所述,支持细胞自噬缺失加重镉暴露诱发雄鼠生殖细胞凋亡。结论:支持细胞自噬拮抗镉诱导雄鼠生殖细胞凋亡。
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