1.SPAG6在巨噬细胞中的表达及功能初探;2.肿瘤患者外周血MDSCs亚型的Meta分析

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本文对SPAG6在巨噬细胞中的表达及功能和肿瘤患者外周血MDSCs亚型的Meta分析进行了研究。本研究分为两个部分:  第一部分:SPAG6在巨噬细胞中的表达及功能初探。SPAG6是微管结构蛋白之一,具有参与精子鞭毛的运动,调节细胞生长,调节纤毛运动及基底细胞的极性等生理功能。巨噬细胞作为抗原提呈细胞,其吞噬抗原、迁移及分泌炎性因子等生物学功能是否也与微管 SPAG6有关呢?因此,本研究拟探讨SPAG6在巨噬细胞表达及其功能,探索巨噬细胞生物学功能新机制,为临床免疫、炎症等相关疾病的研究提供新的理论依据。首先采用巯基乙酸肉汤或 LPS活化巨噬细胞,通过 real-time PCR和 Western Blotting技术检测其SPAG6的mRNA表达和蛋白质表达;随后,设计针对SPAG6基因的siRNA序列,转染RAW264.7细胞系,检测siRNA转染效率和对SPAG6基因沉默效率,并筛选出有沉默效果的siRNA序列;对沉默SPAG6后的RAW264.7细胞系用LPS活化后进行相关功能的检测:通过Griess反应检测其培养上清NO水平,通过吞噬FITC-dextran检测吞噬功能改变。结果发现,巨噬细胞活化后SPAG6的mRNA及蛋白质表达量较静止细胞显著增高;沉默SPAG6基因后的巨噬细胞受LPS活化后,细胞培养上清NO水平较未沉默SPAG6基因的巨噬细胞培养上清降低,而巨噬细胞吞噬FITC-dextran的吞噬率并没有改变,因此认为,SPAG6高表达于活化的巨噬细胞,并不影响其吞噬功能。  第二部分:肿瘤患者外周血MDSCs亚型的Meta分析。肿瘤的发生发展过程复杂,涉及多种因素的参与,病因及发病机制尚不完全清楚。MDSCs是骨髓来源的未成熟的具有免疫抑制功能的细胞群体,聚集在血液,淋巴结,脾脏,肿瘤局部等,能够抑制机体的适应性免疫应答,也能抑制NKT细胞的功能。目前,关于荷瘤鼠 MDSCs的表型、细胞亚类及功能的报道较为一致,而有关肿瘤患者MDSCs的亚类、表型及功能没有一致的认识,MDSCs在肿瘤患者中具体作用有待研究。本文拟对已经报道的肿瘤患者外周血中MDSCs的研究进行Meta分析,以期能总结、归纳肿瘤患者外周血中MDSCs及其亚类与肿瘤之间的关系,为肿瘤检测及预后的判断和肿瘤治疗提供理论依据及治疗靶点。计算机检索各种电子数据库中2015年3月以前发表的文献,并配合综述后参考文献查找与MDSCs和肿瘤有关的英文文献,按照Cochrane协作网推荐的试验纳入标准筛选文献,汇集文中得到的具体数据,统一标准后用Review manager5.3分析,最后结果以森林图显示。共有20篇文献纳入系统评价,其中,肿瘤患者1207例,健康对照480例。分析发现肿瘤患者外周血中MDSCs及亚型(单核型、粒细胞型)的百分比显著高于健康对照,但在肿瘤患者中单核型和粒细胞型MDSCs没有显著性差异。在有关肿瘤分期的6篇文献中,早期肿瘤患者155例,晚期肿瘤患者191例,采用随机效应模型分析MD值为-2.21[95%CI(-2.79,-1.63)],总体效应值Z=7.45(P<0.00001),表明在肿瘤晚期外周血MDSCs的水平显著高于早期。在有肿瘤治疗的7篇文献中,肿瘤患者162例,采用随机效应模型分析MD值为6.28[95%(3.88,8.67)],总体效应值为Z=5.14(P<0.00001),表明治疗后肿瘤患者外周血MDSCs的水平显著降低。综上所述,MDSCs与肿瘤的发生发展及转归密切相关,可以作为肿瘤临床治疗的靶点。
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